TABLE DES MATIÈRES
457
3.8.3. Mesures précises des vitesses initiales........................................................................110
3.8.4. Les décours complets dans d’autres cas .....................................................................114
Problèmes .................................................................................................................................115
4 – ASPECTS PRATIQUES DES ÉTUDES CINÉTIQUES ................................................................119
4.1. Mesure de l’activité enzymatique .................................................................................119
4.1.1. Méthodes continues et discontinues de mesure..........................................................119
4.1.2. Estimation de la vitesse initiale...................................................................................120
4.1.3. Amélioration de la linéarité d’un décours de réaction ...............................................121
4.1.4. Les systèmes couplés...................................................................................................123
4.2. Détection de l’inactivation d’un enzyme.......................................................................127
4.3. Choix des conditions expérimentales ...........................................................................129
4.3.1. Choix des concentrations de substrat..........................................................................129
4.3.2. Choix du pH, de la température et des autres conditions...........................................131
4.3.3. Réplication des mesures ..............................................................................................132
4.4. Traitement des équilibres ioniques ..............................................................................135
Problèmes .................................................................................................................................137
5 – INHIBITION ET ACTIVATION DES ENZYMES...........................................................................139
5.1. Inhibition réversible et irréversible ................................................................................139
5.1.1. Les poisons de la réaction catalytique ........................................................................139
5.1.2. Analyse de la vitesse d’inactivation............................................................................139
5.1.3. Types d’inhibition réversible ......................................................................................140
5.2. Inhibitions linéaires ........................................................................................................141
5.2.1. Inhibition compétitive (ou inhibition spécifique).......................................................141
5.2.2. Inhibition mixte ...........................................................................................................143
5.2.3. L’inhibition anti-compétitive (inhibition catalytique) ..............................................146
5.2.4. Résumé des types d’inhibition linéaire.......................................................................147
5.3. Présentations graphiques des résultats des inhibitions.........................................148
5.4. Relation entre les constantes d’inhibition
et la concentration de demi-inhibition.........................................................................151
5.5. Inhibition par compétition avec un substrat...............................................................154
5.5.1. Spécificité de l’enzyme ...............................................................................................154
5.5.2. Test du déroulement simultané de deux réactions......................................................156
5.5.3. Protection par le substrat .............................................................................................158
5.6. Activation des enzymes.................................................................................................159
5.6.1. Diverses utilisations du terme «activation»................................................................159
5.6.2. Activation spécifique...................................................................................................160
5.6.3. Activation et inhibition hyperboliques .......................................................................163
5.7. Préparation des expériences d’inhibition .....................................................................164
5.8. Effets inhibiteurs des substrats .................................................................................166
5.8.1. Fixation non-productive ..............................................................................................166
5.8.2. Inhibition par le substrat..............................................................................................169
457
3.8.3. Mesures précises des vitesses initiales........................................................................110
3.8.4. Les décours complets dans d’autres cas .....................................................................114
Problèmes .................................................................................................................................115
4 – ASPECTS PRATIQUES DES ÉTUDES CINÉTIQUES ................................................................119
4.1. Mesure de l’activité enzymatique .................................................................................119
4.1.1. Méthodes continues et discontinues de mesure..........................................................119
4.1.2. Estimation de la vitesse initiale...................................................................................120
4.1.3. Amélioration de la linéarité d’un décours de réaction ...............................................121
4.1.4. Les systèmes couplés...................................................................................................123
4.2. Détection de l’inactivation d’un enzyme.......................................................................127
4.3. Choix des conditions expérimentales ...........................................................................129
4.3.1. Choix des concentrations de substrat..........................................................................129
4.3.2. Choix du pH, de la température et des autres conditions...........................................131
4.3.3. Réplication des mesures ..............................................................................................132
4.4. Traitement des équilibres ioniques ..............................................................................135
Problèmes .................................................................................................................................137
5 – INHIBITION ET ACTIVATION DES ENZYMES...........................................................................139
5.1. Inhibition réversible et irréversible ................................................................................139
5.1.1. Les poisons de la réaction catalytique ........................................................................139
5.1.2. Analyse de la vitesse d’inactivation............................................................................139
5.1.3. Types d’inhibition réversible ......................................................................................140
5.2. Inhibitions linéaires ........................................................................................................141
5.2.1. Inhibition compétitive (ou inhibition spécifique).......................................................141
5.2.2. Inhibition mixte ...........................................................................................................143
5.2.3. L’inhibition anti-compétitive (inhibition catalytique) ..............................................146
5.2.4. Résumé des types d’inhibition linéaire.......................................................................147
5.3. Présentations graphiques des résultats des inhibitions.........................................148
5.4. Relation entre les constantes d’inhibition
et la concentration de demi-inhibition.........................................................................151
5.5. Inhibition par compétition avec un substrat...............................................................154
5.5.1. Spécificité de l’enzyme ...............................................................................................154
5.5.2. Test du déroulement simultané de deux réactions......................................................156
5.5.3. Protection par le substrat .............................................................................................158
5.6. Activation des enzymes.................................................................................................159
5.6.1. Diverses utilisations du terme «activation»................................................................159
5.6.2. Activation spécifique...................................................................................................160
5.6.3. Activation et inhibition hyperboliques .......................................................................163
5.7. Préparation des expériences d’inhibition .....................................................................164
5.8. Effets inhibiteurs des substrats .................................................................................166
5.8.1. Fixation non-productive ..............................................................................................166
5.8.2. Inhibition par le substrat..............................................................................................169