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CINÉTIQUE ENZYMATIQUE
c - (8,5.10
–17 mol)/(300.10
–6 l) = 2,8.10
–13 M. La valeur extrêmement faible
de cette concentration vis-à-vis d'une valeur typique de K m est sans
signification puisque la spécificité n'est pas déterminée par K m ; puisque
l'expérience implique que les enzymes doivent choisir parmi une large
gamme de substrats, tous disponibles simultanément, elle fournit un
excellent test pour la spécificité.
6.1 - Les réactions bimoléculaire de substitution simple (appelées réactions SN 2
dans les livres de chimie organique) procèdent communément avec une
inversion de configuration de l'atome substitué. La rétention, comme dans le
cas de l'α-amylase, peut résulter de deux substitutions successives, comme
dans un mécanisme à enzyme modifié ou dans un mécanisme de double
déplacement. Une inversion nette, comme dans le cas de la b-amylase,
suggère un nombre impair d'inversions, comme dans un mécanisme à complexe ternaire ou de simple déplacement (Noter, cependant, que les données
stœchiométriques n'excluent pas un mécanisme à triple déplacement, comme
nous en avons discuté dans le § 6.2.3.)
6.2 - Le mécanisme, comme il est décrit, ne contient aucune étape de premier
ordre, donc la vitesse nette peut en principe être augmentée sans limite en
augmentant les concentrations de substrat. (Dans la majorité des mécanismes, il existe au moins une étape de premier ordre et la saturation est
atteinte parce que le flux à travers une telle étape ne peut être augmenté
indéfiniment en augmentant les concentrations de substrat.)
6.3 - v
VA B
KK
K A
A B
AB
A
=
++
[] []
[][] []
(aucun terme en [] B ) ; le graphique de
[] Bv en fonction de [] B donnerait des droites parallèles dont la pente
est égale à 1 V .
6.4 - a - Hyperbolique.
b - Droites parallèles avec une pente égale à 1 V . Cette approche a été peu
utilisée, mais elle fournit une manière plus rapide et plus simple de
distinguer entre les mécanismes à complexe ternaire et les mécanismes à
enzyme modifié que les méthodes mieux connues. Pour une application à
la kinase des nucléotides diphosphates, voir GARCÉS et CLELAND (1969)
6.5 - Inhibition compétitive pour toutes les paires substrat-produit.
6.6 - Anti-compétitive vis-à-vis de A ; compétitive vis-à-vis de B.
6.7 - f 0
0
=
[] E
v
; f 1
0
=
[] EK
V
mA
; f 2
0
=
[] EK
V
mB
; f 12
0
=
[] EK K
V
iA mB
.
Les droites se croisent en [] S 1
12
2
=
−f
f
,
[]
()
[]
S
vE
1
1
01 2
2
0
=
−
f
ff
f
.
CINÉTIQUE ENZYMATIQUE
c - (8,5.10
–17 mol)/(300.10
–6 l) = 2,8.10
–13 M. La valeur extrêmement faible
de cette concentration vis-à-vis d'une valeur typique de K m est sans
signification puisque la spécificité n'est pas déterminée par K m ; puisque
l'expérience implique que les enzymes doivent choisir parmi une large
gamme de substrats, tous disponibles simultanément, elle fournit un
excellent test pour la spécificité.
6.1 - Les réactions bimoléculaire de substitution simple (appelées réactions SN 2
dans les livres de chimie organique) procèdent communément avec une
inversion de configuration de l'atome substitué. La rétention, comme dans le
cas de l'α-amylase, peut résulter de deux substitutions successives, comme
dans un mécanisme à enzyme modifié ou dans un mécanisme de double
déplacement. Une inversion nette, comme dans le cas de la b-amylase,
suggère un nombre impair d'inversions, comme dans un mécanisme à complexe ternaire ou de simple déplacement (Noter, cependant, que les données
stœchiométriques n'excluent pas un mécanisme à triple déplacement, comme
nous en avons discuté dans le § 6.2.3.)
6.2 - Le mécanisme, comme il est décrit, ne contient aucune étape de premier
ordre, donc la vitesse nette peut en principe être augmentée sans limite en
augmentant les concentrations de substrat. (Dans la majorité des mécanismes, il existe au moins une étape de premier ordre et la saturation est
atteinte parce que le flux à travers une telle étape ne peut être augmenté
indéfiniment en augmentant les concentrations de substrat.)
6.3 - v
VA B
KK
K A
A B
AB
A
=
++
[] []
[][] []
(aucun terme en [] B ) ; le graphique de
[] Bv en fonction de [] B donnerait des droites parallèles dont la pente
est égale à 1 V .
6.4 - a - Hyperbolique.
b - Droites parallèles avec une pente égale à 1 V . Cette approche a été peu
utilisée, mais elle fournit une manière plus rapide et plus simple de
distinguer entre les mécanismes à complexe ternaire et les mécanismes à
enzyme modifié que les méthodes mieux connues. Pour une application à
la kinase des nucléotides diphosphates, voir GARCÉS et CLELAND (1969)
6.5 - Inhibition compétitive pour toutes les paires substrat-produit.
6.6 - Anti-compétitive vis-à-vis de A ; compétitive vis-à-vis de B.
6.7 - f 0
0
=
[] E
v
; f 1
0
=
[] EK
V
mA
; f 2
0
=
[] EK
V
mB
; f 12
0
=
[] EK K
V
iA mB
.
Les droites se croisent en [] S 1
12
2
=
−f
f
,
[]
()
[]
S
vE
1
1
01 2
2
0
=
−
f
ff
f
.