392
CINÉTIQUE ENZYMATIQUE
PROBLÈMES
11.1 - Un enzyme d'une masse moléculaire de 50 kDa est étudié dans une
expérience de cycle unique à une concentration de substrat de 1 μM.
La mesure de la vitesse d'apparition du produit à une concentration
d'enzyme de 1 mg mL
–1 révèle deux phases transitoires, avec des temps
de relaxation de 4,5 ms et de 0,1 s. A 5 mg mL
–1 d'enzyme les valeurs
correspondantes sont 2,8 ms et 31 ms. En supposant le mécanisme le
plus simple en accord avec ces observations, estimer les valeurs des
constantes de vitesse.
11.2 - Les données suivantes peuvent être exprimées par une équation de la
forme yAB
C
tt
=+
+
−−
ee
tt 12 . En supposant que t 1 est inférieur à 5 ms,
estimer les valeurs de A, C et t 2 , et utiliser ces résultats pour estimer B
et t 1 .
t (ms)
yt (ms)
yt (ms)
y
1
2
3
4
5
6
78
68
60
53
48
43
7
8
9
10
15
20
40
37
34
32
25
22
25
30
35
40
45
50
20
19
18
17
17
17
11.3 - Dans des études en conditions d'état stationnaire d'un enzyme, un
inhibiteur compétitif est découvert qui possède un K i = 20 μM. Cette
valeur est interprétée comme une véritable constante d'équilibre. La
constante de MICHAELIS pour le substrat est égale à 0,5 mM. Ensuite, des
expériences de stopped-flow sont réalisées : dans l'expérience (a), une
seringue de l'appareil contient 0,2 mM d'inhibiteur et l'autre contient
50 μM d'enzyme, 0,2 mM d'inhibiteur et 10 mM de substrat ; dans l'expérience (b), une seringue de l'appareil contient 0,2 mM d'inhibiteur et
50 μM d'enzyme et l'autre contient 0,2 mM d'inhibiteur et 10 mM de
substrat. La phase transitoire de la réaction a un temps de relaxation de
7,7 ms dans l'expérience (a) et de 15 ms dans l'expérience (b). Estimer
les constantes de vitesses on et off pour la fixation de l'inhibiteur sur
l'enzyme libre. Les résultats des expériences de stopped-flow confirment-elles l'interprétation originale que K i est une véritable constante
d'équilibre.