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CINÉTIQUE ENZYMATIQUE
Le mécanisme aléatoire à complexe ternaire diffère du mécanisme ordonné par le
fait qu'aucun échange ne peut être complètement inhibé par le substrat qui n'est pas
impliqué dans l'échange. Par exemple, si B est présent en excès, le chemin particulier pour l'échange de A* en P* considéré plus haut est inhibé car E est éliminé
du système, mais l'échange n'est pas complètement inhibé car une voie alternative
existe : à des concentrations élevées de B, A* peut entrer dans des réactions
d'échanges en se fixant sur EB pour donner EA*B. Puisque le comptage de la
radioactivité peut être réalisé de manière très sensible, il est possible de détecter
des chemins réactionnels mineurs par les méthodes d'échange d'isotopes.
7.4. ECHANGE D'ISOTOPES
DANS DES MÉCANISMES À ENZYME MODIFIÉ
L'échange d'isotope permet une simplification utile des mécanismes à enzyme
modifié car il permet d'étudier uniquement une moitié de la réaction à la fois
(figure 7.2). Ce mécanisme a la même forme que le mécanisme complet, avec P* et
A* remplaçant respectivement B et Q, mais les cinétiques sont plus simples car les
constantes de vitesse sont les mêmes pour les deux moitiés de la réaction. Ce type
d'échange représente une différence qualitative majeure entre les mécanismes à
enzyme modifié et les mécanismes à complexe ternaire, parce que dans les mécanismes à complexe ternaire aucun échange ne peut avoir lieu si le système n'est pas
complet. Cette méthode de distinction entre les deux types de mécanismes a été
utilisée et discutée (DOUDOROFF, BOUKER et HASSID, 1947 ; KOSHLAND, 1955)
bien avant l'introduction de l'échange
d'isotopes comme une technique cinétique.
7.2 - Echange isotopique
dans un mécanisme à enzyme modifié
Notons qu'avec ce type de mécanisme,
l'échange d'isotope peut avoir lieu même si le
mélange réactionnel est incomplet, c'est-à-dire
qu'il n'est pas nécessaire que le second
substrat ou le second produit soit présent.
La possibilité d'étudier uniquement certaines parties d'un mécanisme est particulièrement intéressante dans le cas de mécanismes à enzyme modifié plus complexes,
impliquant trois substrats ou plus. Dans de tels cas, toute simplification des cinétiques est évidemment la bienvenue, et cette approche a été utilisée avec un certain
succès, par exemple par CEDAR et SCHWARTZ (1969) dans l'étude de l'asparagine
synthétase.
E
A
P
P*
A*
E'P
EA*
E'P*
EA
E'P
CINÉTIQUE ENZYMATIQUE
Le mécanisme aléatoire à complexe ternaire diffère du mécanisme ordonné par le
fait qu'aucun échange ne peut être complètement inhibé par le substrat qui n'est pas
impliqué dans l'échange. Par exemple, si B est présent en excès, le chemin particulier pour l'échange de A* en P* considéré plus haut est inhibé car E est éliminé
du système, mais l'échange n'est pas complètement inhibé car une voie alternative
existe : à des concentrations élevées de B, A* peut entrer dans des réactions
d'échanges en se fixant sur EB pour donner EA*B. Puisque le comptage de la
radioactivité peut être réalisé de manière très sensible, il est possible de détecter
des chemins réactionnels mineurs par les méthodes d'échange d'isotopes.
7.4. ECHANGE D'ISOTOPES
DANS DES MÉCANISMES À ENZYME MODIFIÉ
L'échange d'isotope permet une simplification utile des mécanismes à enzyme
modifié car il permet d'étudier uniquement une moitié de la réaction à la fois
(figure 7.2). Ce mécanisme a la même forme que le mécanisme complet, avec P* et
A* remplaçant respectivement B et Q, mais les cinétiques sont plus simples car les
constantes de vitesse sont les mêmes pour les deux moitiés de la réaction. Ce type
d'échange représente une différence qualitative majeure entre les mécanismes à
enzyme modifié et les mécanismes à complexe ternaire, parce que dans les mécanismes à complexe ternaire aucun échange ne peut avoir lieu si le système n'est pas
complet. Cette méthode de distinction entre les deux types de mécanismes a été
utilisée et discutée (DOUDOROFF, BOUKER et HASSID, 1947 ; KOSHLAND, 1955)
bien avant l'introduction de l'échange
d'isotopes comme une technique cinétique.
7.2 - Echange isotopique
dans un mécanisme à enzyme modifié
Notons qu'avec ce type de mécanisme,
l'échange d'isotope peut avoir lieu même si le
mélange réactionnel est incomplet, c'est-à-dire
qu'il n'est pas nécessaire que le second
substrat ou le second produit soit présent.
La possibilité d'étudier uniquement certaines parties d'un mécanisme est particulièrement intéressante dans le cas de mécanismes à enzyme modifié plus complexes,
impliquant trois substrats ou plus. Dans de tels cas, toute simplification des cinétiques est évidemment la bienvenue, et cette approche a été utilisée avec un certain
succès, par exemple par CEDAR et SCHWARTZ (1969) dans l'étude de l'asparagine
synthétase.
E
A
P
P*
A*
E'P
EA*
E'P*
EA
E'P