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CINÉTIQUE ENZYMATIQUE
Un graphique secondaire dans lequel la V
app
pour chaque [] B (figure 6.20),
correspondant à l'intersection de chaque droite avec l'ordonnée, permet alors de
déterminer les autres paramètres du modèle. En répétant cette procédure avec le
système fonctionnant en sens inverse, c'est-à-dire en fixant [][] AB == 0 et en
faisant varier [] P et [] Q , il est
possible de déterminer k –5 et les
constantes de dissociation intervenant dans la partie droite du
schéma de la figure 6.18.
6.20 - Graphique secondaire
En accord avec la relation de HALDANE (§ 3.6.3), la constante d'équilibre globale
de la réaction peut être calculée de la manière suivante :
K
VK K
VK K
=
−
16 7
11 2
[6.57]
6.9.1. Application pratique de la mesure des paramètres
pour la créatine kinase
La créatine kinase et les différents enzymes utilisés pour la réalisation des systèmes
couplés, sont des enzymes disponibles commercialement. Ces expériences peuvent
donc servir pour la réalisation de travaux pratiques pour les étudiants. L'étude des
réactions catalysées par la créatine kinase permet de se familiariser avec les systèmes enzymatiques complexes, mais également avec l'utilisation de systèmes
couplés. En effet, la réaction catalysée par la créatine kinase, n'implique pas de
variation de signal spectroscopique facilement exploitable pour suivre la cinétique
de la réaction. La solution à ce problème consiste à utiliser un système couplé qui
va lier la réaction de conversion ATP/ADP à la conversion NAD red /NAD ox . La
conversion NAD red /NAD ox donne lieu à une variation importante de l'absorbance à
340 nm caractérisée par un ε M = 6 200M
–1 cm
–1 (voir § 4.1.1) qui peut donc facilement être suivie par spectrophotométrie.
Le système couplé choisi pour suivre la réaction directe implique deux enzymes
qui catalysent deux réactions successives. La pyruvate kinase utilise l'ADP et le
phosphoénolpyruvate pour former du pyruvate et de l'ATP. Ensuite, la lactate
déshydrogénase réduit le pyruvate en lactate et oxyde le NAD red en NAD ox . Les
1
– ––
K 4
1
–––
[B]
1
––
V
K 4
–––
V
1
––––
V app
0
CINÉTIQUE ENZYMATIQUE
Un graphique secondaire dans lequel la V
app
pour chaque [] B (figure 6.20),
correspondant à l'intersection de chaque droite avec l'ordonnée, permet alors de
déterminer les autres paramètres du modèle. En répétant cette procédure avec le
système fonctionnant en sens inverse, c'est-à-dire en fixant [][] AB == 0 et en
faisant varier [] P et [] Q , il est
possible de déterminer k –5 et les
constantes de dissociation intervenant dans la partie droite du
schéma de la figure 6.18.
6.20 - Graphique secondaire
En accord avec la relation de HALDANE (§ 3.6.3), la constante d'équilibre globale
de la réaction peut être calculée de la manière suivante :
K
VK K
VK K
=
−
16 7
11 2
[6.57]
6.9.1. Application pratique de la mesure des paramètres
pour la créatine kinase
La créatine kinase et les différents enzymes utilisés pour la réalisation des systèmes
couplés, sont des enzymes disponibles commercialement. Ces expériences peuvent
donc servir pour la réalisation de travaux pratiques pour les étudiants. L'étude des
réactions catalysées par la créatine kinase permet de se familiariser avec les systèmes enzymatiques complexes, mais également avec l'utilisation de systèmes
couplés. En effet, la réaction catalysée par la créatine kinase, n'implique pas de
variation de signal spectroscopique facilement exploitable pour suivre la cinétique
de la réaction. La solution à ce problème consiste à utiliser un système couplé qui
va lier la réaction de conversion ATP/ADP à la conversion NAD red /NAD ox . La
conversion NAD red /NAD ox donne lieu à une variation importante de l'absorbance à
340 nm caractérisée par un ε M = 6 200M
–1 cm
–1 (voir § 4.1.1) qui peut donc facilement être suivie par spectrophotométrie.
Le système couplé choisi pour suivre la réaction directe implique deux enzymes
qui catalysent deux réactions successives. La pyruvate kinase utilise l'ADP et le
phosphoénolpyruvate pour former du pyruvate et de l'ATP. Ensuite, la lactate
déshydrogénase réduit le pyruvate en lactate et oxyde le NAD red en NAD ox . Les
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K 4
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–––
[B]
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V
K 4
–––
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