6 – RÉACTIONS À PLUSIEURS SUBSTRATS
213
K
KK
K
B
KB
m
app
iA mB
mA
mB
=
+
+
[]
[]
[6.30]
V
K
V
K
B
KK
K
B
app
m
app
mA
iA mB
mA
=
⎛
⎝
⎜
⎞
⎠
⎟
⎛
⎝
⎜
⎞
⎠
⎟ +
1
[]
[]
[6.31]
Il faut noter que les expressions pour V
app
et VK
app
m
app ont la forme d'une équation
de MICHAELIS et MENTEN vis-à-vis de [] B : cette propriété sera utilisée ultérieurement pour construire des graphiques secondaires (§ 6.5.4).
Cette réduction de l'équation [6.24] à une équation de MICHAELIS et MENTEN avec
des paramètres apparents est un cas particulier d'un type plus général de comportement ayant une implication étendue en enzymologie. Il signifie que même si une
réaction implique deux ou plusieurs substrats, elle peut être traitée comme une
réaction à un seul substrat à condition que la concentration d'un seul substrat varie.
Ceci explique l'importance de l'analyse cinétique de réactions à un seul substrat
dans des conditions d'état stationnaire, même si en réalité comparativement peu
d'enzymes ont un seul substrat.
6.5.3. Les graphiques primaires
pour les mécanismes à complexe ternaire
Une expérience typique permettant de caractériser une réaction en accord avec
l'équation [6.24] implique de réaliser plusieurs sous-expériences, chacune à une
valeur différente de [] B . Chacune de ces sous-expériences est traitée comme une
expérience à un seul substrat dans laquelle les paramètres apparents de MICHAELIS
et MENTEN sont déterminés en analysant la dépendance de la vitesse vis-à-vis de la
concentration de A, [] A . N'importe quelle méthode graphique introduite au
chapitre 3 peut être utilisée pour analyser ces données, avec pour seule différence
par rapport au cas d'un mécanisme à un seul substrat que cette approche fournit des
paramètres apparents et non des paramètres réels. De tels graphiques sont appelés
des graphiques primaires, pour les distinguer des graphiques secondaires dont
nous allons discuter dans le § 6.5.4. Dans le texte ci-dessous, nous nous référerons
uniquement à l'apparence des graphiques de [] Av en fonction de [] A , bien que
les autres graphiques soient également illustrés dans les figures pour comparaison.
La figure 6.13 montre un ensemble typique de graphiques primaires pour un
enzyme qui obéit à l'équation [6.24]. Les droites se coupent en un point unique
pour lequel [] AK iA
=−
et []
(
)
Av
K
K
V
mA
iA
=−
, qui se situe à gauche de l'axe
des [] Av , mais peut être au-dessus ou au-dessous de l'axe [] A selon les valeurs
relatives de K iA et de K mA . Ces coordonnées fournissent la valeur de K iA
directement, mais la détermination des autres paramètres nécessite des graphiques
additionnels des paramètres apparents, comme discuté dans le § 6.5.4.
213
K
KK
K
B
KB
m
app
iA mB
mA
mB
=
+
+
[]
[]
[6.30]
V
K
V
K
B
KK
K
B
app
m
app
mA
iA mB
mA
=
⎛
⎝
⎜
⎞
⎠
⎟
⎛
⎝
⎜
⎞
⎠
⎟ +
1
[]
[]
[6.31]
Il faut noter que les expressions pour V
app
et VK
app
m
app ont la forme d'une équation
de MICHAELIS et MENTEN vis-à-vis de [] B : cette propriété sera utilisée ultérieurement pour construire des graphiques secondaires (§ 6.5.4).
Cette réduction de l'équation [6.24] à une équation de MICHAELIS et MENTEN avec
des paramètres apparents est un cas particulier d'un type plus général de comportement ayant une implication étendue en enzymologie. Il signifie que même si une
réaction implique deux ou plusieurs substrats, elle peut être traitée comme une
réaction à un seul substrat à condition que la concentration d'un seul substrat varie.
Ceci explique l'importance de l'analyse cinétique de réactions à un seul substrat
dans des conditions d'état stationnaire, même si en réalité comparativement peu
d'enzymes ont un seul substrat.
6.5.3. Les graphiques primaires
pour les mécanismes à complexe ternaire
Une expérience typique permettant de caractériser une réaction en accord avec
l'équation [6.24] implique de réaliser plusieurs sous-expériences, chacune à une
valeur différente de [] B . Chacune de ces sous-expériences est traitée comme une
expérience à un seul substrat dans laquelle les paramètres apparents de MICHAELIS
et MENTEN sont déterminés en analysant la dépendance de la vitesse vis-à-vis de la
concentration de A, [] A . N'importe quelle méthode graphique introduite au
chapitre 3 peut être utilisée pour analyser ces données, avec pour seule différence
par rapport au cas d'un mécanisme à un seul substrat que cette approche fournit des
paramètres apparents et non des paramètres réels. De tels graphiques sont appelés
des graphiques primaires, pour les distinguer des graphiques secondaires dont
nous allons discuter dans le § 6.5.4. Dans le texte ci-dessous, nous nous référerons
uniquement à l'apparence des graphiques de [] Av en fonction de [] A , bien que
les autres graphiques soient également illustrés dans les figures pour comparaison.
La figure 6.13 montre un ensemble typique de graphiques primaires pour un
enzyme qui obéit à l'équation [6.24]. Les droites se coupent en un point unique
pour lequel [] AK iA
=−
et []
(
)
Av
K
K
V
mA
iA
=−
, qui se situe à gauche de l'axe
des [] Av , mais peut être au-dessus ou au-dessous de l'axe [] A selon les valeurs
relatives de K iA et de K mA . Ces coordonnées fournissent la valeur de K iA
directement, mais la détermination des autres paramètres nécessite des graphiques
additionnels des paramètres apparents, comme discuté dans le § 6.5.4.