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CINÉTIQUE ENZYMATIQUE
devraient être superposables quelle que soit la valeur de [] E 0 . S’ils ne le sont pas,
l’hypothèse initiale selon laquelle la vitesse doit être proportionnelle à la concentration initiale d’enzyme durant toute la réaction, est incorrecte. La figure 4.3
montre deux exemples de ces graphiques, un dans lequel les résultats sont ceux
attendus pour un test satisfaisant, l’autre dans lequel les résultats ne le sont pas.
4
3
2
1
0
0123
[E] 0 t (unités arbitraires)
[E] 0 t (unités arbitraires)
Avancement de la réaction (%)
a - Tous les points
se situent sur
une seule courbe
0,4 : 1 : 2
100
50
0
024681 0
b - Les points se
répartissent sur deux
courbes distinctes
Glutamyl-ARN (pmol)
2,8 μg mL –1
5,6 μg mL –1
4.3 - Test d’inactivation de SELWYN
Dans une réaction pour laquelle il n’y a pas d’inactivation appréciable de l’enzyme pendant
la période d’observation, des graphiques de l’étendue de la réaction en fonction de [E] 0 t
devraient être superposables, comme dans le graphique (a), qui présente les données de
MICHAELIS et DAVIDSOHN (1911) pour l’invertase à trois concentrations différentes d’enzyme
dans un rapport 0,4 : 1 : 2 comme indiqué. Si l’enzyme s’inactive au cours de la réaction ou
si le rapport n’est pas strictement proportionnel à [E] 0 , les graphiques ne sont pas
superposables, comme dans le graphique (b), qui présente les données de DEUTSCHER
(1967) pour la glutamyl-ARN synthétase à des concentration de 5,6 et 2,8 mg mL
–1 .
La raison la plus simple pour laquelle le test de SELWYN peut être négatif comme
dans la figure 4.3b, est que [] E 0 varie au cours de la réaction en raison d’une
perte d’activité de l’enzyme. SELWYN (1965) a cependant répertorié d’autres
causes possibles, qui expliquent que le test est insatisfaisant ou qu’il est compliqué
de manière telle qu’une étude supplémentaire est nécessaire avant que son
utilisation routinière ne soit possible.
Le test de SELWYN n’est pas couramment utilisé. Pendant les années 1970 et 1980,
cela pouvait être justifié par le développement des moyens et des conditions dans
lesquelles les enzymes devaient être utilisés pour éviter leur inactivation.
Aujourd’hui, le développement des techniques de biologie moléculaire permet de
produire des protéines recombinantes modifiées, qui, dans certains cas, sont moins
stables que la protéine originale. Cela crée un réel besoin de tester l’inactivation de
ces enzymes pendant la réaction, afin d’éviter de comparer les cinétiques de
réaction catalysée par un enzyme stable avec les cinétiques de réaction catalysée
par des variants moins stables susceptibles d’introduire certains artéfacts.
CINÉTIQUE ENZYMATIQUE
devraient être superposables quelle que soit la valeur de [] E 0 . S’ils ne le sont pas,
l’hypothèse initiale selon laquelle la vitesse doit être proportionnelle à la concentration initiale d’enzyme durant toute la réaction, est incorrecte. La figure 4.3
montre deux exemples de ces graphiques, un dans lequel les résultats sont ceux
attendus pour un test satisfaisant, l’autre dans lequel les résultats ne le sont pas.
4
3
2
1
0
0123
[E] 0 t (unités arbitraires)
[E] 0 t (unités arbitraires)
Avancement de la réaction (%)
a - Tous les points
se situent sur
une seule courbe
0,4 : 1 : 2
100
50
0
024681 0
b - Les points se
répartissent sur deux
courbes distinctes
Glutamyl-ARN (pmol)
2,8 μg mL –1
5,6 μg mL –1
4.3 - Test d’inactivation de SELWYN
Dans une réaction pour laquelle il n’y a pas d’inactivation appréciable de l’enzyme pendant
la période d’observation, des graphiques de l’étendue de la réaction en fonction de [E] 0 t
devraient être superposables, comme dans le graphique (a), qui présente les données de
MICHAELIS et DAVIDSOHN (1911) pour l’invertase à trois concentrations différentes d’enzyme
dans un rapport 0,4 : 1 : 2 comme indiqué. Si l’enzyme s’inactive au cours de la réaction ou
si le rapport n’est pas strictement proportionnel à [E] 0 , les graphiques ne sont pas
superposables, comme dans le graphique (b), qui présente les données de DEUTSCHER
(1967) pour la glutamyl-ARN synthétase à des concentration de 5,6 et 2,8 mg mL
–1 .
La raison la plus simple pour laquelle le test de SELWYN peut être négatif comme
dans la figure 4.3b, est que [] E 0 varie au cours de la réaction en raison d’une
perte d’activité de l’enzyme. SELWYN (1965) a cependant répertorié d’autres
causes possibles, qui expliquent que le test est insatisfaisant ou qu’il est compliqué
de manière telle qu’une étude supplémentaire est nécessaire avant que son
utilisation routinière ne soit possible.
Le test de SELWYN n’est pas couramment utilisé. Pendant les années 1970 et 1980,
cela pouvait être justifié par le développement des moyens et des conditions dans
lesquelles les enzymes devaient être utilisés pour éviter leur inactivation.
Aujourd’hui, le développement des techniques de biologie moléculaire permet de
produire des protéines recombinantes modifiées, qui, dans certains cas, sont moins
stables que la protéine originale. Cela crée un réel besoin de tester l’inactivation de
ces enzymes pendant la réaction, afin d’éviter de comparer les cinétiques de
réaction catalysée par un enzyme stable avec les cinétiques de réaction catalysée
par des variants moins stables susceptibles d’introduire certains artéfacts.