4 – ASPECTS PRATIQUES DES ÉTUDES CINÉTIQUES
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L’article original de STORER et CORNISH-BOWDEN (1974) décrit comment les
valeurs sont calculées et donne également les résultats pour v 2 /v 1 = 0,90 et 0,95, en
plus de ceux pour v 2 /v 1 = 0,99, ainsi que pour une plus large gamme de valeurs de
v 1 /V 2 .
La validité de ce traitement peut être vérifiée en mesurant la réaction de couplage
sur une certaine période de temps et en démontrant que la valeur v 2 augmente
de manière attendue. Un exemple d’un tel test est présenté dans la figure 4.2.
Dans cette expérience, la valeur de V 2 a été délibérément mal choisie (trop petite)
afin de rendre la période d’accélération clairement observable.
012345
0
0,02
0,04
0,06
0,08
0,10
Produit formé
(mM)
Temps (minutes)
V 2 = 0,304 mM min –1
V 2 = 0,122 mM min –1
V 2 = 0,0313 mM min –1
4.2 - Phase d’accélération d’un test couplé
Les données sont celles de STORER et CORNISH-BOWDEN (1974) et correspondent au test de
l’hexokinase en utilisant la glucose 6-phosphate déshydrogénase comme enzyme couplé.
Les points expérimentaux présentent (pour des duplica de décours réactionnels à chaque
valeur de V 2 ) les concentrations de NAD red , le produit de la réaction couplée, à différents
temps après le début de la réaction et pour 3 valeurs différentes de V 2 comme indiqué. Les
trois courbes présentées n’ont pas été ajustées sur les données mais elles ont été
calculées indépendamment à partir des valeurs connues de V 2 , en accord avec la théorie
présentée dans le texte qui suit.
Dans certains cas, même si la réaction mesurée peut être suivie en direct, il est
parfois souhaitable de coupler la réaction à une seconde réaction. Par exemple, si
un des produits de la première réaction est un puissant inhibiteur, ou si une réaction
réversible est étudiée dans le sens le moins favorable, de sorte que l’équilibre est
atteint après qu’une faible partie du substrat ait réagit, la mesure précise de la
vitesse initiale peut s’avérer difficile. Des problèmes de ce genre peuvent être
résolus en couplant la réaction à une réaction irréversible qui élimine le produit
inhibiteur ou déplace l’équilibre. Dans ces cas, les contraintes énoncées
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L’article original de STORER et CORNISH-BOWDEN (1974) décrit comment les
valeurs sont calculées et donne également les résultats pour v 2 /v 1 = 0,90 et 0,95, en
plus de ceux pour v 2 /v 1 = 0,99, ainsi que pour une plus large gamme de valeurs de
v 1 /V 2 .
La validité de ce traitement peut être vérifiée en mesurant la réaction de couplage
sur une certaine période de temps et en démontrant que la valeur v 2 augmente
de manière attendue. Un exemple d’un tel test est présenté dans la figure 4.2.
Dans cette expérience, la valeur de V 2 a été délibérément mal choisie (trop petite)
afin de rendre la période d’accélération clairement observable.
012345
0
0,02
0,04
0,06
0,08
0,10
Produit formé
(mM)
Temps (minutes)
V 2 = 0,304 mM min –1
V 2 = 0,122 mM min –1
V 2 = 0,0313 mM min –1
4.2 - Phase d’accélération d’un test couplé
Les données sont celles de STORER et CORNISH-BOWDEN (1974) et correspondent au test de
l’hexokinase en utilisant la glucose 6-phosphate déshydrogénase comme enzyme couplé.
Les points expérimentaux présentent (pour des duplica de décours réactionnels à chaque
valeur de V 2 ) les concentrations de NAD red , le produit de la réaction couplée, à différents
temps après le début de la réaction et pour 3 valeurs différentes de V 2 comme indiqué. Les
trois courbes présentées n’ont pas été ajustées sur les données mais elles ont été
calculées indépendamment à partir des valeurs connues de V 2 , en accord avec la théorie
présentée dans le texte qui suit.
Dans certains cas, même si la réaction mesurée peut être suivie en direct, il est
parfois souhaitable de coupler la réaction à une seconde réaction. Par exemple, si
un des produits de la première réaction est un puissant inhibiteur, ou si une réaction
réversible est étudiée dans le sens le moins favorable, de sorte que l’équilibre est
atteint après qu’une faible partie du substrat ait réagit, la mesure précise de la
vitesse initiale peut s’avérer difficile. Des problèmes de ce genre peuvent être
résolus en couplant la réaction à une réaction irréversible qui élimine le produit
inhibiteur ou déplace l’équilibre. Dans ces cas, les contraintes énoncées