Chapitre II
Matériel et Méthodes
30
2 e étape : l’enrichissement : il est effectué sur le bouillon au sélénite de sodium (SFB) qui a
l’aptitude à favoriser le développement des entérobactéries pathogènes, tout en inhibant les
autres germes d’origine gastrique.
Ajouter 10 ml de la solution mère dans un tube qui contient 9 ml de bouillon SFB avec 2 disques
SFB puis incuber à 37°C pendant 24h.
3 e étape : isolement : cette étape permet un développement sélectif de colonies présentant les
caractéristiques des salmonelles, elle est réalisée sur le milieu Hecktoen.
A partir des cultures en bouillon d’enrichissement, prélever une goutte et ensemencer sur la
surface d’une boite contenant une gélose Hecktoen solide, en faisant des stries pour obtenir des
colonies pures et isolées les unes des autres ; incuber à 37°C pendant 24h.
Lecture et dénombrement :
La suspicion des salmonelles sur milieu Hecktoen se traduit par des colonies bleu-vert à centre
noir.
Test de confirmation : Prélever les colonies suspectes sur le milieu Hecktoen, ensemencer par
stries la pente d’une gélose TSI (Triple Sugar Agar) et par piqure centrale le culot ; incuber à
37°C pendant 24h.
Lancement de la Galerie Api20E : c’est un système standardisé pour l’identification des
Enterobacteriaceae et autres bacilles à Gram négatif non fastidieux, comprenant 21 tests
biochimiques miniaturisé, ainsi qu’une base de données.
• Principe : la Galerie comporte 20 microtubes contenant des substrats déshydratés. Les
microtubes sont inoculés avec une suspension bactérienne qui reconstitue les tests. Les
réactions produites pendant la période d’incubation (24h à 37°C) se traduisent par des
virages colorés spontanés ou révélés par l’addition de réactifs.
La lecture de ces réactions se fait à l’aide du tableau de lecture et d’identification est
obtenue à l’aide de catalogue analytique ou d’un logiciel d’identification.
Matériel et Méthodes
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2 e étape : l’enrichissement : il est effectué sur le bouillon au sélénite de sodium (SFB) qui a
l’aptitude à favoriser le développement des entérobactéries pathogènes, tout en inhibant les
autres germes d’origine gastrique.
Ajouter 10 ml de la solution mère dans un tube qui contient 9 ml de bouillon SFB avec 2 disques
SFB puis incuber à 37°C pendant 24h.
3 e étape : isolement : cette étape permet un développement sélectif de colonies présentant les
caractéristiques des salmonelles, elle est réalisée sur le milieu Hecktoen.
A partir des cultures en bouillon d’enrichissement, prélever une goutte et ensemencer sur la
surface d’une boite contenant une gélose Hecktoen solide, en faisant des stries pour obtenir des
colonies pures et isolées les unes des autres ; incuber à 37°C pendant 24h.
Lecture et dénombrement :
La suspicion des salmonelles sur milieu Hecktoen se traduit par des colonies bleu-vert à centre
noir.
Test de confirmation : Prélever les colonies suspectes sur le milieu Hecktoen, ensemencer par
stries la pente d’une gélose TSI (Triple Sugar Agar) et par piqure centrale le culot ; incuber à
37°C pendant 24h.
Lancement de la Galerie Api20E : c’est un système standardisé pour l’identification des
Enterobacteriaceae et autres bacilles à Gram négatif non fastidieux, comprenant 21 tests
biochimiques miniaturisé, ainsi qu’une base de données.
• Principe : la Galerie comporte 20 microtubes contenant des substrats déshydratés. Les
microtubes sont inoculés avec une suspension bactérienne qui reconstitue les tests. Les
réactions produites pendant la période d’incubation (24h à 37°C) se traduisent par des
virages colorés spontanés ou révélés par l’addition de réactifs.
La lecture de ces réactions se fait à l’aide du tableau de lecture et d’identification est
obtenue à l’aide de catalogue analytique ou d’un logiciel d’identification.