Chapitre II
Matériel et Méthodes
28
Lecture et dénombrement :
Les colonies des coliformes totaux et fécaux ont un aspect lenticulaire avec une couleur rouge,
fluorescentes sous lampes UV. Dénombrer les colonies avec le même aspect sur le milieu
V.R.B.L, les résultats sont exprimés en UFC/g.
Test de confirmation d’E.coli :
Repiquer les colonies suspectes des boites positives dans des tubes d’eau peptonnée exempte
d’indole, incubé à 37°C pendant 24h, rajouter ensuite quelques gouttes de réactif de Kovacs.
L’Anneau rouge confirme que c’est le germe Escherichia coli.
➢ Recherche et dénombrement de staphylocoques à coagulase + :
Définition : Les staphylocoques constituent avec les microcoques les deux principaux genres
de la famille des Micrococcaceae. Ce sont des Cocci à Gram positif, non sporulés, immobiles,
aérobie facultatif possédant une catalase et se présentent généralement en grappes, par paires
ou en cellules individuelles. Leur paroi est principalement constituée de peptidoglycane.
Staphylocoques à coagulase positive, notamment Staphylococcus aureus, principal producteur
d’entérotoxines pathogènes pour l’homme, possèdent une enzyme, la coagulase qui permet de
les identifier.
Principe : ensemencement par étalement de 0.1 ml de la suspension mère en surface de la
gélose Baird Parker.
Mode opératoire :
A l’aide d’un pipette Pasteur stérile, on ensemence sur la surface d’une boite de pétri contenant
une gélose Baird Parker, jaune d’œuf et tellurite de potassium pré-coulée et solide, on étale la
surface à l’aide d’un râteau. Incubation à 37°C pendant 48h.
Lecture et dénombrement :
Procéder au comptage des colonies caractéristiques. Les colonies caractéristiques des
staphylococues forment des colonies noires (réduction du tellurite en tellure) et produisent sur
ce milieu opaque :
-un halo clair autour de la colonie qui correspond à une zone de protéolyse (éclaircissement du
jaune d’œuf).
Matériel et Méthodes
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Lecture et dénombrement :
Les colonies des coliformes totaux et fécaux ont un aspect lenticulaire avec une couleur rouge,
fluorescentes sous lampes UV. Dénombrer les colonies avec le même aspect sur le milieu
V.R.B.L, les résultats sont exprimés en UFC/g.
Test de confirmation d’E.coli :
Repiquer les colonies suspectes des boites positives dans des tubes d’eau peptonnée exempte
d’indole, incubé à 37°C pendant 24h, rajouter ensuite quelques gouttes de réactif de Kovacs.
L’Anneau rouge confirme que c’est le germe Escherichia coli.
➢ Recherche et dénombrement de staphylocoques à coagulase + :
Définition : Les staphylocoques constituent avec les microcoques les deux principaux genres
de la famille des Micrococcaceae. Ce sont des Cocci à Gram positif, non sporulés, immobiles,
aérobie facultatif possédant une catalase et se présentent généralement en grappes, par paires
ou en cellules individuelles. Leur paroi est principalement constituée de peptidoglycane.
Staphylocoques à coagulase positive, notamment Staphylococcus aureus, principal producteur
d’entérotoxines pathogènes pour l’homme, possèdent une enzyme, la coagulase qui permet de
les identifier.
Principe : ensemencement par étalement de 0.1 ml de la suspension mère en surface de la
gélose Baird Parker.
Mode opératoire :
A l’aide d’un pipette Pasteur stérile, on ensemence sur la surface d’une boite de pétri contenant
une gélose Baird Parker, jaune d’œuf et tellurite de potassium pré-coulée et solide, on étale la
surface à l’aide d’un râteau. Incubation à 37°C pendant 48h.
Lecture et dénombrement :
Procéder au comptage des colonies caractéristiques. Les colonies caractéristiques des
staphylococues forment des colonies noires (réduction du tellurite en tellure) et produisent sur
ce milieu opaque :
-un halo clair autour de la colonie qui correspond à une zone de protéolyse (éclaircissement du
jaune d’œuf).