Chapitre II
Matériel et Méthodes
27
➢ Recherche et dénombrement des coliformes totaux et les thermotolérants dont
E. coli :
Définition : les coliformes totaux sont des entérobactéries qui incluent des espèces bactériennes
qui vivent dans l’intestin des animaux, mais aussi dans l’environnement en général (sols,
végétation et eau). Ce groupe bactérien est utilisé comme indicateur de la qualité microbienne
parce qu’il contient notamment des bactéries d’origine fécale.
Le terme « coliformes fécaux » ou « coliformes thermotolérants » renferme toutes les espèces
bactériennes faisant partie de la famille des Enterobacteriacea qui sont aérobies ou anaérobies
facultatifs, à gram négatif, asporulées, en forme de bâtonnet capables de croitre en présence de
sels biliaires et de fermenter le lactose avec production d’acide (ou d’aldéhyde) et de gaz en
48h à 44°C. (Gourmelon, et al., 2002).
Au plan taxonomique, les coliformes thermotolérants constituent un groupe hétérogène qui
comporte plusieurs genres comprenant des espèces d’origine non fécale et des espèces d’origine
fécale dont l’espèce typique est Escherichia coli, mais d’autres souches de coliformes, telles
que Citrobacter sp, Enterobacter sp et Klebsiella sp, peuvent aussi se reproduire dans un milieu
lactosé à 44,5°C.
Les coliformes fécaux sont des micro-organismes indicateurs d’une pollution d’origine fécale
humaine ou animale. Ils sont généralement moins nombreux que les coliformes totaux et
indiquent qu’il y a contamination récente ou constante.
Principe : ensemencement par incorporation de la solution mère et de la première solution fille
10
-2 dans un milieu V.R.B.L (violet rouge bile lactose).
Mode opératoire :
A partir de la suspension mère et la première solution fille 10
-2
et à l’aide d’une pipette Pasteur
stérile, porter aseptiquement et répartir, 1 ml dans une boite de Pétri stérile, couler 15 ml de
contenant de la gélose V.R.B.L et répartir en dessinant un huit pour permettre à l’inoculum de
se mélanger à la gélose. Laisser solidifier, après solidification incubé les boites de coliformes
totaux à 37°C et les boites des coliformes thermotolérants à 44°C pendant 24h.
Matériel et Méthodes
27
➢ Recherche et dénombrement des coliformes totaux et les thermotolérants dont
E. coli :
Définition : les coliformes totaux sont des entérobactéries qui incluent des espèces bactériennes
qui vivent dans l’intestin des animaux, mais aussi dans l’environnement en général (sols,
végétation et eau). Ce groupe bactérien est utilisé comme indicateur de la qualité microbienne
parce qu’il contient notamment des bactéries d’origine fécale.
Le terme « coliformes fécaux » ou « coliformes thermotolérants » renferme toutes les espèces
bactériennes faisant partie de la famille des Enterobacteriacea qui sont aérobies ou anaérobies
facultatifs, à gram négatif, asporulées, en forme de bâtonnet capables de croitre en présence de
sels biliaires et de fermenter le lactose avec production d’acide (ou d’aldéhyde) et de gaz en
48h à 44°C. (Gourmelon, et al., 2002).
Au plan taxonomique, les coliformes thermotolérants constituent un groupe hétérogène qui
comporte plusieurs genres comprenant des espèces d’origine non fécale et des espèces d’origine
fécale dont l’espèce typique est Escherichia coli, mais d’autres souches de coliformes, telles
que Citrobacter sp, Enterobacter sp et Klebsiella sp, peuvent aussi se reproduire dans un milieu
lactosé à 44,5°C.
Les coliformes fécaux sont des micro-organismes indicateurs d’une pollution d’origine fécale
humaine ou animale. Ils sont généralement moins nombreux que les coliformes totaux et
indiquent qu’il y a contamination récente ou constante.
Principe : ensemencement par incorporation de la solution mère et de la première solution fille
10
-2 dans un milieu V.R.B.L (violet rouge bile lactose).
Mode opératoire :
A partir de la suspension mère et la première solution fille 10
-2
et à l’aide d’une pipette Pasteur
stérile, porter aseptiquement et répartir, 1 ml dans une boite de Pétri stérile, couler 15 ml de
contenant de la gélose V.R.B.L et répartir en dessinant un huit pour permettre à l’inoculum de
se mélanger à la gélose. Laisser solidifier, après solidification incubé les boites de coliformes
totaux à 37°C et les boites des coliformes thermotolérants à 44°C pendant 24h.