Deuxième partie :
matériel et méthodes
33
Kjeldahl et la méthode micro-Kjeldahl. Elles diffèrent seulement par l’appareillage utilisé et les
quantités d’échantillons: la masse d’échantillon analysée par la méthode macro-Kjeldahl est environ
5 fois plus élevée que celle analysée par la méthode micro-Kjeldahl. (SALGHIR. R, 2004)
II-1-2-- Principe :
La détermination des protéines par la méthode micro Kjeldahl s’effectue en trois étapes:
Étape 1: Digestion ou minéralisation de l’échantillon
Pendant l’étape de la digestion, l’azote protéique est transformé en azote ammoniacal par
oxydation de la matière organique dans l’acide sulfurique concentré à haute température, en
présence d’un catalyseur et d’un sel:
- l’acide sulfurique concentré a pour but d’oxyder la matière organique et de transformer l’azote
protéique en ammoniac NH
3
. Il sert également à piéger l’ammoniac gazeux sous la forme de sulfate
d’ammonium, par action de la base avec l’acide:
- l’addition du sel de sulfate de potassium (K
2
SO
4
) a pour but d’élever le point d’ébullition de la
solution pour accélérer la réaction de minéralisation de la matière organique.
- le catalyseur utilisé est le sélénium (Se).
La réaction chimique est la suivante : H 2 SO 4 + N (aliment) → SO 4 (NH 4 ) 2
Étape 2: Distillation de l’ammoniac
Avant de distiller l’ammoniac à la vapeur d’eau, on doit le libérer par l’addition d’une solution
concentrée de NaOH en excès. La transformation chimique est :
SO 4 (NH 4 ) 2 + 2NaOH → SO 4 Na 2 + 2NH 4 OH
L’ammoniac est ensuite distillé par la vapeur d’eau et piégé dans une solution d’acide borique.
L’ammoniac réagit avec l’acide borique pour former des sels de borate d’ammonium:
La transformation chimique est :
NH 4 OH + H 3 BO 3 → BO 3 H 2 NH 4 + H 2 O
(Sel borate d’ammonium)
Étape 3: Titrage de l’ammoniac
L’ammoniac sous la forme de borate d’ammonium est titré directement à l’aide d’une solution
standardisée d’acide chlorhydrique HCl, et d’un indicateur (le Tashiro):
BO 3 H 2 NH 4 + HCl → NH 4 Cl + H 3 BO 3
matériel et méthodes
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Kjeldahl et la méthode micro-Kjeldahl. Elles diffèrent seulement par l’appareillage utilisé et les
quantités d’échantillons: la masse d’échantillon analysée par la méthode macro-Kjeldahl est environ
5 fois plus élevée que celle analysée par la méthode micro-Kjeldahl. (SALGHIR. R, 2004)
II-1-2-- Principe :
La détermination des protéines par la méthode micro Kjeldahl s’effectue en trois étapes:
Étape 1: Digestion ou minéralisation de l’échantillon
Pendant l’étape de la digestion, l’azote protéique est transformé en azote ammoniacal par
oxydation de la matière organique dans l’acide sulfurique concentré à haute température, en
présence d’un catalyseur et d’un sel:
- l’acide sulfurique concentré a pour but d’oxyder la matière organique et de transformer l’azote
protéique en ammoniac NH
3
. Il sert également à piéger l’ammoniac gazeux sous la forme de sulfate
d’ammonium, par action de la base avec l’acide:
- l’addition du sel de sulfate de potassium (K
2
SO
4
) a pour but d’élever le point d’ébullition de la
solution pour accélérer la réaction de minéralisation de la matière organique.
- le catalyseur utilisé est le sélénium (Se).
La réaction chimique est la suivante : H 2 SO 4 + N (aliment) → SO 4 (NH 4 ) 2
Étape 2: Distillation de l’ammoniac
Avant de distiller l’ammoniac à la vapeur d’eau, on doit le libérer par l’addition d’une solution
concentrée de NaOH en excès. La transformation chimique est :
SO 4 (NH 4 ) 2 + 2NaOH → SO 4 Na 2 + 2NH 4 OH
L’ammoniac est ensuite distillé par la vapeur d’eau et piégé dans une solution d’acide borique.
L’ammoniac réagit avec l’acide borique pour former des sels de borate d’ammonium:
La transformation chimique est :
NH 4 OH + H 3 BO 3 → BO 3 H 2 NH 4 + H 2 O
(Sel borate d’ammonium)
Étape 3: Titrage de l’ammoniac
L’ammoniac sous la forme de borate d’ammonium est titré directement à l’aide d’une solution
standardisée d’acide chlorhydrique HCl, et d’un indicateur (le Tashiro):
BO 3 H 2 NH 4 + HCl → NH 4 Cl + H 3 BO 3