Chapitre 3: matériel et méthodes
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o Peser 5g d’alumine, le mélanger avec l’hexane dans un petit bécher et le faire
introduire dans la colonne par un petit entonnoir.
o Tasser bien l’alumine à l’aide d’une spatule.
o Laisser couler l’hexane jusqu’à atteindre un volume de 2 ml afin d’éviter
l’assèchement de la colonne.
o Ajouter 0,5 g de Na 2 SO 4 afin d’absorber l’eau si elle existe.
o À présent la colonne est prête à l’utilisation, à noter qu’il faut répéter les mêmes
étapes après introduction de chaque échantillon.
Fractionnement de la phase aliphatique
o Introduire l’échantillon dans la colonne après agitation.
o Ajouter 20 ml d’hexane.
o Récupérer la première phase qui est la fraction aliphatique dans des flacons en
verre
o conditionnés au préalable d’une contenance de 25 ml. Et les fermés avec un
bouchon séparé par du papier aluminium et enroulé avec du téflon.
o Conserver les flacons au frais.
Fractionnement de la phase aromatique
o Ajouter 20 ml du mélange d’hexane-dichlorométhane dans les proportions (90/10).
o Ajouter 30 ml du mélange hexane-dichlorométhane dans les proportions (70/30).
o Récupérer la deuxième fraction qui est la phase aromatique dans des tubes à essais
conditionnés.
o Faire une deuxième concentration sous jet d’azote.
o Conserver les échantillons au frais.
4. Analyse des HAP par spectrofluorimètre ultraviolet
Principe de la SFUV
La SFUV mesure l’émission de la fluorescence des molécules soumises à un rayonnement
d’excitation ultra-violet. Cette technique d’analyse nécessite des radiations
électromagnétiques comprises entre 200 et 400 nm dont l’énergie est élevée.
Elle ne s’applique pas aux liaisons de covalence C-H (les hydrocarbures aliphatiques) mais
elle s’applique aux molécules possédant des liaisons doubles conjuguées (Les
hydrocarbures aromatiques/poly aromatiques).
La SFUV est une technique d’analyse appliquée et préconisée par le C.O.I (1984) pour la
surveillance de la pollution des hydrocarbures en mer. La fluorescence représente un
excellent indice de présence pollution pétrolière du fait des très faibles teneurs en
hydrocarbures biogènes dans le milieu marin. (Bodennec et al, 1983).
La fluorescence est un phénomène qui se produit en deux phases :
L’excitation
Dans cette phase la molécule passe de son état électronique fondamental vers un état
excité. L’ensemble des transitions électroniques constitue le spectre d’excitation.
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o Peser 5g d’alumine, le mélanger avec l’hexane dans un petit bécher et le faire
introduire dans la colonne par un petit entonnoir.
o Tasser bien l’alumine à l’aide d’une spatule.
o Laisser couler l’hexane jusqu’à atteindre un volume de 2 ml afin d’éviter
l’assèchement de la colonne.
o Ajouter 0,5 g de Na 2 SO 4 afin d’absorber l’eau si elle existe.
o À présent la colonne est prête à l’utilisation, à noter qu’il faut répéter les mêmes
étapes après introduction de chaque échantillon.
Fractionnement de la phase aliphatique
o Introduire l’échantillon dans la colonne après agitation.
o Ajouter 20 ml d’hexane.
o Récupérer la première phase qui est la fraction aliphatique dans des flacons en
verre
o conditionnés au préalable d’une contenance de 25 ml. Et les fermés avec un
bouchon séparé par du papier aluminium et enroulé avec du téflon.
o Conserver les flacons au frais.
Fractionnement de la phase aromatique
o Ajouter 20 ml du mélange d’hexane-dichlorométhane dans les proportions (90/10).
o Ajouter 30 ml du mélange hexane-dichlorométhane dans les proportions (70/30).
o Récupérer la deuxième fraction qui est la phase aromatique dans des tubes à essais
conditionnés.
o Faire une deuxième concentration sous jet d’azote.
o Conserver les échantillons au frais.
4. Analyse des HAP par spectrofluorimètre ultraviolet
Principe de la SFUV
La SFUV mesure l’émission de la fluorescence des molécules soumises à un rayonnement
d’excitation ultra-violet. Cette technique d’analyse nécessite des radiations
électromagnétiques comprises entre 200 et 400 nm dont l’énergie est élevée.
Elle ne s’applique pas aux liaisons de covalence C-H (les hydrocarbures aliphatiques) mais
elle s’applique aux molécules possédant des liaisons doubles conjuguées (Les
hydrocarbures aromatiques/poly aromatiques).
La SFUV est une technique d’analyse appliquée et préconisée par le C.O.I (1984) pour la
surveillance de la pollution des hydrocarbures en mer. La fluorescence représente un
excellent indice de présence pollution pétrolière du fait des très faibles teneurs en
hydrocarbures biogènes dans le milieu marin. (Bodennec et al, 1983).
La fluorescence est un phénomène qui se produit en deux phases :
L’excitation
Dans cette phase la molécule passe de son état électronique fondamental vers un état
excité. L’ensemble des transitions électroniques constitue le spectre d’excitation.