Chapitre II : Matériel et méthode.
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II.3.8
Conservation
des
souches
bactériennes
par
cryoconservation
II.3.8.1 Principe de la conservation des soches bactériennes par
cryoconservation
La cryoconservation est une technique de congélation des tissus ou des cellules à préserver
pour utilisation ultérieures. Les cellules sont généralement stockées à des basses
températures pour stopper toute activités biologiques y compris les réactions biochimiques
qui conduisent à la mort cellulaire.
Pour cela on utilise des solutions cryoprotectrices comme le glycérol, qui protègent les tissus
biologiques du gel et les dommages causés par la formation de glace.
II.3.8.2 Mode opératoire
- Dans des tubes Eppendorf stériles, mettre 500ul de glycérol à 100%
- Prélever 500 µl de culture liquide mure et les verser dans le tube contenant le
glycérol ;
- Homogéniser le mélange ;
- Conserver au réfrigérateur à -20°C.
II.4 Test biochimiques
II.4.1 Test catalase
II.4.1.1 Principe
Cette enzyme catalyse la décomposition du peroxyde d’hydrogène (H2O2) qui est produit
par certaines réactions cellulaires et qui est très toxiques, donc c’est l’une des enzymes
chargés d’éponger l’eau oxygénée par la dismutation (PELMONT, 1993).
La réaction catalysée est la suivante :
2H2O2
O2 + 2H2O
Le test de la catalase consiste essentiellement à ajouter du peroxyde d’hydrogène à des
bactéries : la présence de catalase donne lieu à l’apparition de bulles d’oxygène.