Chapitre II : Matériel et méthode.
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Remarque : il n’est pas possible de verser directement l’hydrocarbure sur la surface de la
gélose vue que ce dernier ne s’étale pas correctement et risque de s’évaporer.
II.3.6 Réisolement sur milieu solide
II.3.6.1 Ensemencement solide-solide
Après croissance bactériennes sur milieu solide, les colonies phénotypiquement différentes
obtenues à partir des boites ont été réisoler sur milieu solide, afin de les purifier. Les colonies
ont été réisoler dans les mêmes conditions que l’étape précédente.
II.3.7 Réisolement sur milieu liquide à partir d’un milieu solide
II.3.7.1 Ensemencement solide-liquide
Cette méthode consiste à ensemencer les colonies purifiées dans du milieu liquide avec
hydrocarbures, afin d’éliminer les bactéries autotrophes et pour s’assurer que les colonies
obtenues ont utilisé l’hydrocarbure comme source de carbone.
II.3.7.2 Mode opératoire
- Verser 5 ml de milieu ONR7 dans un tube à essai stérile.
- A partir de la boite de pétri contenant les souches purifiées, prélever une colonie
isolée à l’aide d’une anse de platine et l’ensemencer dans le tube à essai contenant le
milieu liquide
- Ajouter 50µl d’hydrocarbure et fermer le tube.
- Passer le tube dans d’un vortex pour bien mélange.
- Incuber les tubes à 30°C avec agitation.
- Seules les isolats présentant une croissance prononcée, ont été conservés pour
d’autres caractérisations.