Matériel et méthodes
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III.9.2. Recherche de gènes de céphalosporinases
La PCR multiplex utilise des paires multiples d’amorces pour amplifier simultanément un
grand nombre de séquences contrairement à une PCR simplex où une paire d’amorces est
utilisée. Elle a été utilisée dans l’identification des gènes de céphalosporinases
plasmidiques telles que : MOX, FOX, CIT, EBC, ACC et DHA. Les réactions ont été
réalisées dans un volume final de 25 μl comprenant:
PCR master Mix (2X)…………...12.5µl.
FOX-MF 0.4 μM …………………0.4μl.
FOX-MR 0.4 μM …………………0.4μl.
MOX-MF 0.6 μM ………………...0.6μl.
MOX-MR 0.6 μM ………………..0.6μl.
CIT-MF 0.6 μM …………………..0.6μl.
CIT-MR 0.6 μM ………………….0.6μl.
DHA-MF 0.6 μM ………………..0.6μl.
DHA-MR 0.6 μM ………………..0.6μl.
ACC-MF 0.5 μM …………………0.5μl.
ACC-MR 0.5 μM ………………..0.5μl.
EBC-MF 0.5 μM ………………...0.5μl.
EBC-MR 0.5 μM …………………0.5μl.
H 2 O………………………………..1.1μl.
ADN ………………………………..5μl.
Les séquences des amorces et les programmes utilisés sont décrits dans le tableau 5.
Les produits d’amplification ont été soumis à une électrophorèse sur gel d’agarose à 2%.