Matériel et méthodes
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récupéré dans un eppendorf stérile et conservé à -20°C. Cet extrait a été utilisé comme
matrice pour la réalisation des PCR.
III.9. Recherche de gènes de résistance par PCR
 Principe
La Réaction de Polymérisation en Chaine (de l’anglais Polymerase Chain Reaction ou
PCR) est une technique d’amplification de l’ADN in vitro. Elle permet d’obtenir un très
grand nombre de copies d’une séquence d’ADN choisie. Chaque cycle de PCR est
constitué de trois étapes : une dénaturation de l’ADN par chauffage pour séparer les deux
brins qui le composent, une hybridation des amorces aux extrémités de la séquence
recherchée, puis une élongation grâce à l’action d’une ADN polymérase thermophile
(Markoulatos et al., 2002).
III.9.1.Recherche des gènes de béta-lactamases et béta-lactamases à spectre élargi par
PCR Simplex
La PCR simplex a été programmée pour la recherche Les gènes de béta-lactamases et
béta_lactamases à spectre élargi (bla TEM , bla SHV , bla CTX-M , bla VEB , bla PER et bla GES ) ont été
recherchés par PCR. Les réactions ont été réalisées dans un volume final de 12.5 µl
comprenant :
PCR master Mix (2X)……………6.25μl.
Amorce forward 0.25 μM ….........0.25μl.
Amorce reverse 0.25μM ………...0.25μl.
H 2 O………………………………3.25μl.
ADN……………………………....2.5μl.
Les séquences des amorces et les programmes utilisés sont décrits dans le tableau 5.
Les produits d’amplification ont été séparés par électrophorèse sur gel d’agarose à 1%.