Matériel et méthodes
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Le test de l'oxydase a été réalisé en déposant quelques colonies de la bactérie à identifier
sur un disque contenant l’oxalate de dimethyl-paraphenylène-diamine qui est incolore
(commercialisé prêt à l’emploi). L’apparition d'une coloration violette est indicative de la
présence de l'oxydase.
III.4. Etude de la sensibilité aux autres antibiotiques par antibiogramme
Principe
L’étude de la sensibilité des souches aux antibiotiques est réalisée selon la méthode de
diffusion des antibiotiques en disques en milieu gélose (Courvalin et al., 1985; CA-SFM,
2015). Celle-ci est basée sur l’observation de la croissance bactérienne en présence d’un
gradient de concentration d’antibiotique obtenu par diffusion des antibiotiques à partir des
disques. Ce gradient est inversement proportionnel à la distance par rapport aux disques.
La croissance bactérienne s’arrête lorsque les bactéries sont en contact avec une
concentration inhibitrice autour du disque d’antibiotique.
Technique
A partir d’une culture de 18-24 h sur milieu gélosé non sélectif (Mueller Hinton), une
suspension bactérienne en eau physiologique (0.9% NaCl) est réalisée afin d’atteindre une
turbidité équivalente à celle de l’étalon 0,5 de la gamme de Mc Farland. Cet inoculum est
ensemencé par écouvillonnage sur la surface d’une gélose de Mueller-Hinton
préalablement séchée. Après une pré-diffusion des antibiotiques à température ambiante
pendant 15 min et incubation pendant 18-24 h à 35±2°C, la lecture des boites de culture est
faite en mesurant avec précision les diamètres d’inhibition à l’aide d’un pied à coulisse.
Les résultats sont interprétés selon les diamètres d’inhibitions indiquées dans les
communiqués du Comité de l’Antibiogramme de la Société Française de Microbiologie de
2013 et 2015.
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Le test de l'oxydase a été réalisé en déposant quelques colonies de la bactérie à identifier
sur un disque contenant l’oxalate de dimethyl-paraphenylène-diamine qui est incolore
(commercialisé prêt à l’emploi). L’apparition d'une coloration violette est indicative de la
présence de l'oxydase.
III.4. Etude de la sensibilité aux autres antibiotiques par antibiogramme
Principe
L’étude de la sensibilité des souches aux antibiotiques est réalisée selon la méthode de
diffusion des antibiotiques en disques en milieu gélose (Courvalin et al., 1985; CA-SFM,
2015). Celle-ci est basée sur l’observation de la croissance bactérienne en présence d’un
gradient de concentration d’antibiotique obtenu par diffusion des antibiotiques à partir des
disques. Ce gradient est inversement proportionnel à la distance par rapport aux disques.
La croissance bactérienne s’arrête lorsque les bactéries sont en contact avec une
concentration inhibitrice autour du disque d’antibiotique.
Technique
A partir d’une culture de 18-24 h sur milieu gélosé non sélectif (Mueller Hinton), une
suspension bactérienne en eau physiologique (0.9% NaCl) est réalisée afin d’atteindre une
turbidité équivalente à celle de l’étalon 0,5 de la gamme de Mc Farland. Cet inoculum est
ensemencé par écouvillonnage sur la surface d’une gélose de Mueller-Hinton
préalablement séchée. Après une pré-diffusion des antibiotiques à température ambiante
pendant 15 min et incubation pendant 18-24 h à 35±2°C, la lecture des boites de culture est
faite en mesurant avec précision les diamètres d’inhibition à l’aide d’un pied à coulisse.
Les résultats sont interprétés selon les diamètres d’inhibitions indiquées dans les
communiqués du Comité de l’Antibiogramme de la Société Française de Microbiologie de
2013 et 2015.