Matériel et méthodes
52
III.2.1. Dénombrement de la flore mésophile aérobie totale
Un volume de 100 µl de la suspension mère et de chaque dilution a été étalé à la surface de
la gélose Mueller Hinton. L’opération a été réalisée en duplicata et les boites ont été
incubées à 37°C pendant 24 heures.
On retient les deux boites de la dilution donnant un nombre compris entre 30 et 300
colonies. Le nombre de colonies trouvées sera exprimé en Unité Formant une Colonie par
gramme de poisson (UFC/g).
III.2.2. Dénombrement des coliformes totaux et thermo-tolérants
Un volume de 100 µl de la suspension mère et de chaque dilution a été étalé à la surface de
la gélose Mc Conkey. L’opération a été réalisée en duplicata et les boites ont été incubées
pendant 24 heures à 37°C pour les coliformes totaux et à 44°C pour les coliformes
thermotolérants (fécaux). Le dénombrement des coliformes totaux et thermotolérants se
fait par comptage des colonies rouges (lactose positives) entourées d’un halo opaque
(précipitation des sels biliaires).
L’expression des résultats se fait de la même manière que pour la flore mésophile aérobie
totale.
(
)
∗ ∗
III.2.3. Détection et prévalence de la résistance aux antibiotiques
Des aliquotes de 0,1 ml de la suspension mère et des dilutions ont été étalés à la surface
des géloses Mueller Hinton (FMAT) et Mac Conkey (CT) additionnées de l’un des
antibiotiques suivants: amoxicilline (AMX), céfotaxime (CTX), ceftazidime (CAZ),
imipénème (IMP), ciprofloxacine (CIP), gentamicine (GM) et tétracycline (TE). Les
concentrations critiques d'antibiotiques utilisées sont mentionnées dans le tableau 4.
=
∗ ∗
d : facteur de la dilution retenue
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III.2.1. Dénombrement de la flore mésophile aérobie totale
Un volume de 100 µl de la suspension mère et de chaque dilution a été étalé à la surface de
la gélose Mueller Hinton. L’opération a été réalisée en duplicata et les boites ont été
incubées à 37°C pendant 24 heures.
On retient les deux boites de la dilution donnant un nombre compris entre 30 et 300
colonies. Le nombre de colonies trouvées sera exprimé en Unité Formant une Colonie par
gramme de poisson (UFC/g).
III.2.2. Dénombrement des coliformes totaux et thermo-tolérants
Un volume de 100 µl de la suspension mère et de chaque dilution a été étalé à la surface de
la gélose Mc Conkey. L’opération a été réalisée en duplicata et les boites ont été incubées
pendant 24 heures à 37°C pour les coliformes totaux et à 44°C pour les coliformes
thermotolérants (fécaux). Le dénombrement des coliformes totaux et thermotolérants se
fait par comptage des colonies rouges (lactose positives) entourées d’un halo opaque
(précipitation des sels biliaires).
L’expression des résultats se fait de la même manière que pour la flore mésophile aérobie
totale.
(
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∗ ∗
III.2.3. Détection et prévalence de la résistance aux antibiotiques
Des aliquotes de 0,1 ml de la suspension mère et des dilutions ont été étalés à la surface
des géloses Mueller Hinton (FMAT) et Mac Conkey (CT) additionnées de l’un des
antibiotiques suivants: amoxicilline (AMX), céfotaxime (CTX), ceftazidime (CAZ),
imipénème (IMP), ciprofloxacine (CIP), gentamicine (GM) et tétracycline (TE). Les
concentrations critiques d'antibiotiques utilisées sont mentionnées dans le tableau 4.
=
∗ ∗
d : facteur de la dilution retenue