Matériel et méthodes
51
II.4. Les souches de référence
Deux souches de référence ont été utilisées:
E. coli ATCC 25922 pour le contrôle de l'antibiogramme et des CMIs.
E. coli K12 BM21 résistante à l'acide nalidixique et à l'azide de sodium (NA
R
AZ
R
)
comme réceptrice dans les transferts génétiques par conjugaison.
III. Méthodes
III.1.Préparation des échantillons de poissons pour l’analyse microbiologique
Les échantillons ont été lavés à l’extérieur avec de l’eau distillée stérile pour réduire la
contamination potentielle extérieure. La préparation des échantillons a été faite selon les
recommandations d’EAS, (2008).
Dans le cas de la sardine et du rouget, 25g du broyat obtenu à partir de 4 à 5 individus ont
été dilués dans 225 ml d’Eau Peptonée Tamponnée (EPT). Les suspensions ainsi préparées
sont maintenues à température ambiante durant 15-20 min afin de permettre la
revivification des microorganismes présents. Chaque suspension correspond à une solution
mère (1/10) à partir de laquelle des dilutions décimales successives sont préparées.
Dans le cas du mulet, en raison de son poids qui peut atteindre 1 Kg (gros espèce), nous
avons travaillé sur un ou deux individus en procédant à un échantillonnage représentatif
(chair, peau, intestin, branchies…). La même procédure utilisée pour la sardine et le mulet
a été adoptée pour la préparation de la suspension mère du mulet.
III.2. Dénombrement de la flore mésophile aérobie totale et des coliformes totaux
dans les poissons
Le dénombrement de la flore mésophile aérobie totale et des coliformes totaux contenus
dans les poissons a été effectué par la méthode d’ensemencement en surface en utilisant la
gélose Mueller Hinton pour la flore mésophile aérobie totale et la gélose Mac Conkey les
coliformes totaux (Miranda et Zemelman, 2001 ; Matyar et al., 2004).
51
II.4. Les souches de référence
Deux souches de référence ont été utilisées:
E. coli ATCC 25922 pour le contrôle de l'antibiogramme et des CMIs.
E. coli K12 BM21 résistante à l'acide nalidixique et à l'azide de sodium (NA
R
AZ
R
)
comme réceptrice dans les transferts génétiques par conjugaison.
III. Méthodes
III.1.Préparation des échantillons de poissons pour l’analyse microbiologique
Les échantillons ont été lavés à l’extérieur avec de l’eau distillée stérile pour réduire la
contamination potentielle extérieure. La préparation des échantillons a été faite selon les
recommandations d’EAS, (2008).
Dans le cas de la sardine et du rouget, 25g du broyat obtenu à partir de 4 à 5 individus ont
été dilués dans 225 ml d’Eau Peptonée Tamponnée (EPT). Les suspensions ainsi préparées
sont maintenues à température ambiante durant 15-20 min afin de permettre la
revivification des microorganismes présents. Chaque suspension correspond à une solution
mère (1/10) à partir de laquelle des dilutions décimales successives sont préparées.
Dans le cas du mulet, en raison de son poids qui peut atteindre 1 Kg (gros espèce), nous
avons travaillé sur un ou deux individus en procédant à un échantillonnage représentatif
(chair, peau, intestin, branchies…). La même procédure utilisée pour la sardine et le mulet
a été adoptée pour la préparation de la suspension mère du mulet.
III.2. Dénombrement de la flore mésophile aérobie totale et des coliformes totaux
dans les poissons
Le dénombrement de la flore mésophile aérobie totale et des coliformes totaux contenus
dans les poissons a été effectué par la méthode d’ensemencement en surface en utilisant la
gélose Mueller Hinton pour la flore mésophile aérobie totale et la gélose Mac Conkey les
coliformes totaux (Miranda et Zemelman, 2001 ; Matyar et al., 2004).