__________________________________________ CHAPITRE II : MATERIEL ET METHODES
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La méthode de recherche de la catalase consiste à mettre une goutte de suspension bactérienne
sur une lame de verre sur laquelle on ajoute une goutte de H 2 O 2 . La présence de l’enzyme se
manifeste par un dégagement de bulles de gaz une réaction d’effervescence (LARPENT et
LARPENT, 1990)
II.2.5. L’étude du potentiel probiotique des bactéries
II.2.5.1 Tests de bioactivité
II.2.5.1. 1. Le test du pouvoir antagoniste par la méthode des spots (FLEMING et al. 1975)
Le présent test a concerné les souches bactériennes isolées à partir du milieu MRS et M17, vis-àvis une collection de bactéries pathogènes: Pseudomonas aeruginosa, Vibrio anguillarum,
Staphylococcus aureus, Vibrio alginolytics, Pseudomonas fluorescens, Aeromonas hydrophila,
Klebsiella pneumoniae, Listeria monocytogenes, Vibrio fluvialis, Escherichia coli ATCC29522.
10 μl du inoculum de chaque souche de bactérie tests ont été ensemencés en spots sur des boites
de Pétri et laissés sécher, puis incubées à 37°C pendant 24 heures (FERNANDEZ et al. 2007).
A partir d’une suspension jeune de 18h, 1ml de chaque souche pathogène (une densité optique de
(DO) 0,4 à une longueur d’onde de 570 nm (10
6 UFC/ml)) (ZHOU et al. 2000), cette
suspension a été inoculé dans des tubes à essais rempli avec 9 ml de BHI gélose en surfusion.
Après homogénéisation, la gélose sera coulée dans les boites de gélose MRS contenant les spots
de bactéries formées et ensuite ces derniers seront incubés à 37°C pendant 24 heures (Figure
13).
A la fin de la période d’incubation, les boites sont examinées par l’apparition des zones
d’inhibition de la croissance du germe pathogène autour des emplacements des spots.
Le diamètre des zones d’inhibition produites ont été mesuré (le diamètre d’inhibition calculé
correspond à la différence entre le diamètre de la zone d’inhibition et le diamètre du spot de la
souche test) (FLEMING et al. 1975).
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La méthode de recherche de la catalase consiste à mettre une goutte de suspension bactérienne
sur une lame de verre sur laquelle on ajoute une goutte de H 2 O 2 . La présence de l’enzyme se
manifeste par un dégagement de bulles de gaz une réaction d’effervescence (LARPENT et
LARPENT, 1990)
II.2.5. L’étude du potentiel probiotique des bactéries
II.2.5.1 Tests de bioactivité
II.2.5.1. 1. Le test du pouvoir antagoniste par la méthode des spots (FLEMING et al. 1975)
Le présent test a concerné les souches bactériennes isolées à partir du milieu MRS et M17, vis-àvis une collection de bactéries pathogènes: Pseudomonas aeruginosa, Vibrio anguillarum,
Staphylococcus aureus, Vibrio alginolytics, Pseudomonas fluorescens, Aeromonas hydrophila,
Klebsiella pneumoniae, Listeria monocytogenes, Vibrio fluvialis, Escherichia coli ATCC29522.
10 μl du inoculum de chaque souche de bactérie tests ont été ensemencés en spots sur des boites
de Pétri et laissés sécher, puis incubées à 37°C pendant 24 heures (FERNANDEZ et al. 2007).
A partir d’une suspension jeune de 18h, 1ml de chaque souche pathogène (une densité optique de
(DO) 0,4 à une longueur d’onde de 570 nm (10
6 UFC/ml)) (ZHOU et al. 2000), cette
suspension a été inoculé dans des tubes à essais rempli avec 9 ml de BHI gélose en surfusion.
Après homogénéisation, la gélose sera coulée dans les boites de gélose MRS contenant les spots
de bactéries formées et ensuite ces derniers seront incubés à 37°C pendant 24 heures (Figure
13).
A la fin de la période d’incubation, les boites sont examinées par l’apparition des zones
d’inhibition de la croissance du germe pathogène autour des emplacements des spots.
Le diamètre des zones d’inhibition produites ont été mesuré (le diamètre d’inhibition calculé
correspond à la différence entre le diamètre de la zone d’inhibition et le diamètre du spot de la
souche test) (FLEMING et al. 1975).