__________________________________________ CHAPITRE II : MATERIEL ET METHODES
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II.2.4. Identification
II.2.4. 1. Aspect Macroscopique
La première étape du diagnostic bactérien et du biotypage d’une souche est la description
macroscopique des colonies isolées ; parfois cette seule étude permet de connaître le germe
qu’on a en présence. On s’intéresse dans ce cas à plusieurs caractères tels que : la forme, la
couleur, le contour, le relief et la taille.
II.2.4. 2.Coloration de Gram
Les cultures pures ont été caractérisées par coloration de Gram, selon des procédures standard
(SHARPE, 1979 )
On réalise un frottis fixé sur une lame de microscope à partir d'une suspension
bactérienne: On dépose une goutte de la suspension bactérienne au milieu de la lame en
faisant des rotations jusqu’à séchage sur flamme du bec Bunsen.
La coloration au violet de Gentiane la lame est plongée pendant 1 minute dans la
coloration au violet de gentiane. Après l’écoulement du temps on rince la lame à l’eau
distillée.
Mordançage au lugol : verser le lugol et laisser agir 1min ; Rincer à l'eau distillée.
Décoloration à l'alcool: Surveiller la décoloration à l’alcool de 10 à 15 secondes. Rincer
sous un filet d'eau distillée.
Contre coloration avec de la Fuchsine: laisser agir 1 minute. Laver doucement à l'eau
distillée. Sécher la lame à l’aide du papier joseph et passer à la lecture sous microscope
optique aux grossissements 100X avec l’huile d’immersion.
II.2.4.3. Test catalase
Chez les bactéries douées d’un métabolisme oxydatif, le système respiratoire compte parmi
d’autres enzymes une catalase, celle-ci décompose l’eau oxygénée selon la réaction suivante :
Catalase
2H 2 O
2H 2 O + O2
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II.2.4. Identification
II.2.4. 1. Aspect Macroscopique
La première étape du diagnostic bactérien et du biotypage d’une souche est la description
macroscopique des colonies isolées ; parfois cette seule étude permet de connaître le germe
qu’on a en présence. On s’intéresse dans ce cas à plusieurs caractères tels que : la forme, la
couleur, le contour, le relief et la taille.
II.2.4. 2.Coloration de Gram
Les cultures pures ont été caractérisées par coloration de Gram, selon des procédures standard
(SHARPE, 1979 )
On réalise un frottis fixé sur une lame de microscope à partir d'une suspension
bactérienne: On dépose une goutte de la suspension bactérienne au milieu de la lame en
faisant des rotations jusqu’à séchage sur flamme du bec Bunsen.
La coloration au violet de Gentiane la lame est plongée pendant 1 minute dans la
coloration au violet de gentiane. Après l’écoulement du temps on rince la lame à l’eau
distillée.
Mordançage au lugol : verser le lugol et laisser agir 1min ; Rincer à l'eau distillée.
Décoloration à l'alcool: Surveiller la décoloration à l’alcool de 10 à 15 secondes. Rincer
sous un filet d'eau distillée.
Contre coloration avec de la Fuchsine: laisser agir 1 minute. Laver doucement à l'eau
distillée. Sécher la lame à l’aide du papier joseph et passer à la lecture sous microscope
optique aux grossissements 100X avec l’huile d’immersion.
II.2.4.3. Test catalase
Chez les bactéries douées d’un métabolisme oxydatif, le système respiratoire compte parmi
d’autres enzymes une catalase, celle-ci décompose l’eau oxygénée selon la réaction suivante :
Catalase
2H 2 O
2H 2 O + O2