Flambage du dispositif par le bec bunsen après chaque échantillon filtré, afin d’éviter toute
contamination possible.
b. 1. Dénombrement des coliformes totaux et coliformes thérmotolerants
-Test présomptif
Un volume de 100 ml d’échantillon a été filtré, la membrane est déposée sur un milieu gélosé
sélectif Tergitol-TTC. L’opération est répétée deux fois. L’une des boites est incubée à 37°C
pendant 24h à 48h pour la recherche des coliformes totaux, et l’autre à 44°C pour la
recherche des coliformes thérmotolerants. La sélectivité augmente par la présence
d’heptadécylsulfate de sodium (Tergitol ,7) et du 2, 3, 5-triphenylterazoliumchloride (TTC)
qui inhibe la plupart des bactéries Gram positive. La réduction du TTC par les bactéries
lactose - négative produit des colonies rouge foncée. E. coli et les coliformes lactose -
positifs réduisent faiblement le TTC ; les colonies sont alors jaune orange (CEAE, 2005a).
o Test confirmatif :
• Devant un bec bunsen et sur une paillasse javellisée, plusieurs repiquages ont été
réalisés.
A partir d’une culture sur gélose
Tergitol
Repiquage d’une colonie
jaune.
Ensemencement dans un tube contenant de l’eau exempte d’indole
Incubation à 44°C en bain marie pendant
24h
Figure11: Technique de recherche des Coliformes .Fécaux (CF) et Escerichia coli :Test
confirmatif.
19
Apparition d’un anneau rouge après addition
de quelques gouttes de réactif de Kovacs, donc
production d’indole