II .3. Méthodes d’Analyses
II.3.1. Analyse physico-chimique (voir annexe 1)
a. Température
Les mesures de température ont été effectuées par un
Conductimètre marque :
Wissenschaftlich technische werkstatten « WTW ».
b. Salinité
Les valeurs de salinité ont été affichées sur un conductimètre marque : Wissenschaftlich
technische werkstatten « WTW ».
c. Conductivité
Conductivité correspondant à la chlorinité de l’eau de mer normale .La mesure de la
conductivité a été effectué in situ a l’aide d’une valise du Conductimètre marque :
Wissenschaftlich technische werkstatten " WTW ".
II.3.2. Analyse microbiologique Méthodes de dénombrement
Les germes test recherchés et dénombrés sont les coliformes totaux, coliformes
thérmotolerants, E.coli et les streptocoques du groupe D. Dans notre étude nous avons optés
pour la méthode de filtration sur membrane car c’est une méthode rapide, simple et
reproductible.
a. Matériel
L’appareil est un simple système de filtration de marque Sartorius fonctionnant sous pression
réduite (pompe a vide), il contient un support à filtre qui reçoit la membrane de filtration et
un flacon pour récupérer l’eau filtrée (figure11) .Les membranes utilisées sont de marque
millipore avec un diamètre de 0,45µm.
b. Mode opératoire
La réalisation de la technique de filtration sur membrane a été faite selon les
recommandations suivantes :
• Devant un bec bunsen et sur une paillasse javellisée ;
• Lavage et stérilisation de l’équipement de filtration de pour flambage ;
• Mise en place de la pompe à vide ;
• Prendre une membrane filtrante stérile prés du bord à l’aide d’une pince stérilisée par
flambage à la flamme et la déposer sur le support du filtre ;
• Placer l’entonnoir sur le support et le fixer fermement ;
• Verser dans chaque entonnoir un volume 100ml d’échantillon bien homogénéisé ;
• Faire le vide jusqu’à filtration totale de l’échantillon ;
• Retirer l’entonnoir et déposer la membrane filtrante à l’aide d’une pince stérile sur un
milieu adapté aux bactéries recherchées.
• Déposer la membrane en la déroulant pour tenir un contact étroit avec la gélose (la
présence de bulles d’air est signalée par des taches blanches) ;
• Inscrire sur la boite de pétri le numéro de l’échantillon et le volume filtré ;
• Placer les boite de Pétri en position inverse et les incuber à une température donnée et
pendant une duré spécifique pour chaque germe ;
18
II.3.1. Analyse physico-chimique (voir annexe 1)
a. Température
Les mesures de température ont été effectuées par un
Conductimètre marque :
Wissenschaftlich technische werkstatten « WTW ».
b. Salinité
Les valeurs de salinité ont été affichées sur un conductimètre marque : Wissenschaftlich
technische werkstatten « WTW ».
c. Conductivité
Conductivité correspondant à la chlorinité de l’eau de mer normale .La mesure de la
conductivité a été effectué in situ a l’aide d’une valise du Conductimètre marque :
Wissenschaftlich technische werkstatten " WTW ".
II.3.2. Analyse microbiologique Méthodes de dénombrement
Les germes test recherchés et dénombrés sont les coliformes totaux, coliformes
thérmotolerants, E.coli et les streptocoques du groupe D. Dans notre étude nous avons optés
pour la méthode de filtration sur membrane car c’est une méthode rapide, simple et
reproductible.
a. Matériel
L’appareil est un simple système de filtration de marque Sartorius fonctionnant sous pression
réduite (pompe a vide), il contient un support à filtre qui reçoit la membrane de filtration et
un flacon pour récupérer l’eau filtrée (figure11) .Les membranes utilisées sont de marque
millipore avec un diamètre de 0,45µm.
b. Mode opératoire
La réalisation de la technique de filtration sur membrane a été faite selon les
recommandations suivantes :
• Devant un bec bunsen et sur une paillasse javellisée ;
• Lavage et stérilisation de l’équipement de filtration de pour flambage ;
• Mise en place de la pompe à vide ;
• Prendre une membrane filtrante stérile prés du bord à l’aide d’une pince stérilisée par
flambage à la flamme et la déposer sur le support du filtre ;
• Placer l’entonnoir sur le support et le fixer fermement ;
• Verser dans chaque entonnoir un volume 100ml d’échantillon bien homogénéisé ;
• Faire le vide jusqu’à filtration totale de l’échantillon ;
• Retirer l’entonnoir et déposer la membrane filtrante à l’aide d’une pince stérile sur un
milieu adapté aux bactéries recherchées.
• Déposer la membrane en la déroulant pour tenir un contact étroit avec la gélose (la
présence de bulles d’air est signalée par des taches blanches) ;
• Inscrire sur la boite de pétri le numéro de l’échantillon et le volume filtré ;
• Placer les boite de Pétri en position inverse et les incuber à une température donnée et
pendant une duré spécifique pour chaque germe ;
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