Chapitre II : Matériel et méthodes
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nm, suite au changement de la couleur de la solution étalon suivant la concentration de la
BSA (bovine sérum albumine).
Principe
Méthode colorimétrique décrite par Gornall et al. Les liaisons peptidiques des protéines
réagissent avec Cu
2+ en solution alcaline pour former un complexe coloré dont
l’absorbance, proportionnelle à la concentration en protéines dans le spécimen, est mesurée
à 550 nm. Le réactif Biuret contient du sodium potassium tartrate qui complexe les ions
cuivriques et maintient leur solubilité en solution alcaline (Biolabo, 2019).
Matériel
- 10g de la chair de daurade royale (sauvage/ élevage) ;
- Balance de précision ;
- Les réactifs (BSA, TCA) ;
- Vortex ;
- Spectrophotomètre ;
- Centrifugeuse.
Mode opératoire
- Préparation de la gamme d'étalonnage : dissoudre 1g de BSA (Bovin sérum albumine)
dans 100 ml d'eau distillée purifié.
- Cette solution a été diluée pour parvenir à une solution finale de BSA de 1g/L
- Pour les échantillons à analyser, on prépare des solutions mères par la dissolution de 1 g
de chair broyée dans un volume de 10 ml d'eau distillée ultra pure, bien agiter au vortex.
- On prend 10 ml de chaque solution mère et on ajoute 2 ml d'acide trichloracétique
(TCA).
- Mélanger soigneusement et passer à la centrifugation 6000 tours par minute pendant 20
minutes.
- Jeter le surnageant et dissoudre le culot dans 10ml d'eau distillée ultra pure.
- Bien agiter au vortex jusqu’à l’obtention d’une solution homogène claire.