CHAPITRE II : MATERIEL ET METHODES
27
c) Dosages des lipides totaux
L’extraction et le dosage des lipides totaux a été réalisé par la méthode de « soxhlet ». (La même
méthode utilisée pour le dosage des matières premières).
d) Extraction et détermination de la teneur en caroténoïdes
Mode opératoire : (Protocole Travaux pratiques Nutrition-alimentation, 4éme année
aquaculture. Dr Akrour -Aissou, 2020).
Filtration sous vide :
10g de la poudre de l’échantillon a été pesée, cette prise d’essai a été filtrée dans un Buchner
sous vide avec 40ml d’Hexane - Ethanol (1:1), le mélange a été maintenu pendant quelques
minutes. La filtration a été continuée jusqu’à la décoloration du résidu (l’échantillon est épuisé 3
à 4 fois). Soit V1 ce volume.
Saponification
Un volume égal de KOH méthanoïque 10% a été ajouté à la solution obtenue. Le mélange a été
chauffé pendant 10 minutes dans un bain marie puis refroidis rapidement dans un bac de glace.
Lavage
Le mélange a été transvasé dans une ampoule à décanter et additionné par 25 ml d’Hexane et 20
ml d’eau distillée, (une simple agitation a été procédée). Après décantation, deux phases ont été
obtenues : phase aqueuse et phase organique. La phase aqueuse est extraite 2 à 3 fois par 40ml
de solvant Ethanol – Hexane (1 :1), chaque fois la phase organique obtenue est rajoutée à la
première phase organique. Cette dernière a été filtrée en présence de Na2 SO4 qui est additionné
au filtre pour éliminer l’humidité.
La solution obtenue a été évaporée dans un rotavapeur à 40°C pour récupérer l’Hexane. Après
l’évaporation du solvant, le volume a été ajusté à 25ml avec le l’Hexane. Voir (Figure 5, annexe
II).
La solution de l’extrait obtenu a été transvasée dans une fiole colorée en brun et conservée au
frais (4°C).
Lecture au spectromètre
La teneur en caroténoïdes a été déterminée par spectrophotométrie UV, dont λ= 450 nm.
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c) Dosages des lipides totaux
L’extraction et le dosage des lipides totaux a été réalisé par la méthode de « soxhlet ». (La même
méthode utilisée pour le dosage des matières premières).
d) Extraction et détermination de la teneur en caroténoïdes
Mode opératoire : (Protocole Travaux pratiques Nutrition-alimentation, 4éme année
aquaculture. Dr Akrour -Aissou, 2020).
Filtration sous vide :
10g de la poudre de l’échantillon a été pesée, cette prise d’essai a été filtrée dans un Buchner
sous vide avec 40ml d’Hexane - Ethanol (1:1), le mélange a été maintenu pendant quelques
minutes. La filtration a été continuée jusqu’à la décoloration du résidu (l’échantillon est épuisé 3
à 4 fois). Soit V1 ce volume.
Saponification
Un volume égal de KOH méthanoïque 10% a été ajouté à la solution obtenue. Le mélange a été
chauffé pendant 10 minutes dans un bain marie puis refroidis rapidement dans un bac de glace.
Lavage
Le mélange a été transvasé dans une ampoule à décanter et additionné par 25 ml d’Hexane et 20
ml d’eau distillée, (une simple agitation a été procédée). Après décantation, deux phases ont été
obtenues : phase aqueuse et phase organique. La phase aqueuse est extraite 2 à 3 fois par 40ml
de solvant Ethanol – Hexane (1 :1), chaque fois la phase organique obtenue est rajoutée à la
première phase organique. Cette dernière a été filtrée en présence de Na2 SO4 qui est additionné
au filtre pour éliminer l’humidité.
La solution obtenue a été évaporée dans un rotavapeur à 40°C pour récupérer l’Hexane. Après
l’évaporation du solvant, le volume a été ajusté à 25ml avec le l’Hexane. Voir (Figure 5, annexe
II).
La solution de l’extrait obtenu a été transvasée dans une fiole colorée en brun et conservée au
frais (4°C).
Lecture au spectromètre
La teneur en caroténoïdes a été déterminée par spectrophotométrie UV, dont λ= 450 nm.