Chapitre II
MATERIEL ET METHODES
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Test positif
II.11.3.2
Pour le test positif on a utilisé lauryl sulfate de sodium (LSS).
Le témoin positif a servi à l’étalonnage, ainsi à évaluer la sensibilité des larves d’Artemia salina
utilisées pour nos tests. Les concentrations testées sont les suivants : 2, 5, 10, 20, 40, 60,80 et 100
µg /ml.
Trois (3) séries de dilutions sont testées avec trois répliquât pour chaque concentration, 2 ml de
solution sont versés dans chaque puits contenant 10 nauplies, et incubé en obscurité. 24h après, les
nauplies morts sont comptées.
La plaque multipuits est placée sous une loupe binoculaire, ainsi que, la mortalité est enregistrée
dans chaque puit, en déterminant le nombre d’individus morts, (aucun mouvement des appendices
n’est observé après 10 secondes) (Cf. Figure 23).
Figure 23: Comptage des individus morts (de la présente étude)
II.11.4 Détermination des CL 50 des souches actives
Les souches actives sélectionnées par le premier test de dépistage, font ensuite l'objet d'une étude
plus approfondie (Cf. Figure 24). Pour la détermination de leur CL 50 , les jus ayant montré une forte
activité lors du premier test sont dilués aux 1/10 et 1/2.
Calcul de la CL 50
A partir de la courbe représentant le probit de pourcentage de mortalité en fonction du logarithme
de la concentration (courbe sigmoïde), il a été possible de déterminer la CL 50 en calculant au
préalable la pente (a) et l’ordonnée à l’origine (b) de la portion droite centrale de cette courbe selon
l’équation (Sallenave, 1999) :
CL 50 = 10
(50-a)/b