Chapitre II
MATERIEL ET METHODES
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Figure 21: Obtention des larves.
Après 20 à 24 heures (durée d’incubation) les nauplies éclosent, après 48h au début de l’incubation,
toutes les larves avaient muées jusqu’au stade 2-3, ces derniers ont été démontrés dans plusieurs
articles qu’ils sont les deux stades les plus sensibles (Sanchez et al, 1996, 1997 ; Sorgeloos 1978 ;
Persoone et al, 1981), donc ils ont été utilisés dans notre test de toxicité.
Après ce temps d’incubation, stoppez le bullage, laissez reposer le mélange pendant pas plus de 15
min, ce qui est pour but de séparer les œufs non éclos des nauplies et des cystes vides. Cette
séparation est d’autant améliorée en éclairant une zone supérieure du bécher avec une lampe. Les
œufs non éclos vont sédimenter au fond de bécher et les œufs éclos vont se retrouver à la surface.
La lumière permet de concentrer les nauplies sur une zone pour faciliter leur récolte à l’aide d’une
pipette.
II.11.3 Test préliminaire
À partir des 56 extraits fongiques récoltés, 18 souches ont été sélectionnées pour le test préliminaire
Le volume contenu dans chacun des puits est de 2,5ml. Pour chaque extrait fongique, 3 répétitions
sont réalisées.
Dans chaque puits sont additionnées 10 larves obtenues précédemment. Aprés 24 h dans l’obscurité,
à température ambiante, les nauplies morts sont comptés, (Cf. Figure 22).
Figure 22: Plaques multipuits pour le test de toxicité d’Artemia salina gardées en obscurité
Tests négatifs
II.11.3.1
En outre, des tests témoins négatifs sont représentés par l’eau de mer et deux témoins d’innocuité, le
milieu liquide non ensemencés YESD et CZ, ils ne doivent pas être l’origine d’aucune toxicité
(Sallenave, 1999).