Chapitre II :
Matériel et méthodes
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IV.4.3. Recherche de la coagulase
A l’aide d’un fil stérile, on prélève des colonies dans les boîtes sélectionnées qui présentent
des colonies caractéristiques, et les ensemencer dans un tube de bouillon, cœur-cervelle.
(BHIB), Incuber à 35°C ou 37°C pendant 24± 2 h.
Juste après l’incubation, ajouter aseptiquement 0,1 ml de plasma de lapin dans des tubes
stériles à hémolyse et incuber 37°C pendant 4 à 24 heures. En inclinant le tube, examiner la
coagulation du plasma après 4 h à 6 h d’incubation :
❖ Un test positif, lors de la formation d’un coagulum occupe plus de la moitié du volume
initialement occupé par le liquide.
❖ Des résultats faussement négatifs peuvent survenir pour certaines souches produisant de la
staphylokinase (fibrinolysine), qui peuvent lyser le caillot après sa formation
(généralement après une incubation prolongée).
❖ Expression des résultats
Le comptage des colonies caractéristiques et/ou non caractéristiques des staphylocoques à
coagulase positive, pour chaque boite ne contentant pas plus de 150 colonies et au maximum
300 colonies. Le résultat est exprimé avec la formule (1).
Pour le comptage des staphylocoques à coagulase positive identifiées pour chaque boîte
retenue, le calcul se fait comme suite :
𝑎 =
𝐵𝑐
𝐴𝑐
× í µí°¶í µí± +
𝐵𝑛𝑐
𝐴𝑛𝑐
× í µí°¶í µí±›
Avec :
o Ac : est le nombre de colonies caractéristiques soumises au test de la coagulase.
o Anc : est le nombre de colonies non caractéristiques soumis au test de la coagulase.
o Bc : est le nombre de colonies caractéristiques qui ont répondu positivement au test de la
coagulase.
o Bnc : est le nombre de colonies non caractéristiques qui ont répondu positivement au test
de la coagulase.
o Cc : est le nombre total de colonies caractéristiques repérées sur la boîte.
o Cnc : est le nombre total de colonies non caractéristiques repérées sur la boîte.