Chapitre II :
Matériel et méthodes
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Figure 15:Résultats d’un test catalase, le test est dit Positif lorsqu’il y’a bouillonnement actif.
Le test est dit Négatif lorsqu’il y’a pas ou très peu de bulles produites (Source :
MicrobiologyInfo.com).
IV.4.2. Test oxydase
La recherche de l'oxydase est un des critères les plus discriminatifs et les plus employés pour
l'identification des bactéries, surtout celle des bacilles à Gram négatif. Cette recherche
consiste à mettre en évidence la capacité de la bactérie testée à oxyder la forme réduite
incolore de dérivés méthylés du paraphénylène diamine, en leur forme oxydée rose violacé.
La cytochrome oxydase est la dernière enzyme de la chaîne respiratoire qui assure le transfert
des électrons sur l'oxygène (ou un autre oxydant minéral (Mellouk ,2017).
A l’aide d’une pince stérile placer un disque d'oxydase sur une lame porte-objet et l'imbiber
avec une goutte d'eau physiologique stérile. Choisir une colonie bien isolée et représentative
de la culture fraiche, l’a prélevé à l’aide d’un ose en platine déposer sur le disque et l’étaler
doucement.
 Réaction positive : coloration bleu foncé à violet apparaissant dans un délai de 30
secondes.
 Réaction négative : absence de coloration ou coloration au-delà de 30 secondes.
La mise en évidence de l’enzyme « la phénylène diamine oxydase » des bactéries à partir de
leur culture en milieu gélosé avec le réactif le N diméthyle paraphénylène diamine (NDPD) :
𝑹é𝒂𝒄𝒕𝒊𝒐𝒏 𝒊𝒏𝒄𝒐𝒍𝒐𝒓𝒆 (𝑵𝑫𝑷𝑫)
𝐏𝐡é𝐧𝐲𝐥è𝐧𝐞 𝐝𝐢𝐚𝐦𝐢𝐧𝐞 𝐨𝐱𝐲𝐝𝐚𝐬𝐞
→
𝑪𝒐𝒎𝒑𝒐𝒔é 𝒓𝒐𝒔é