Chapitre II :
Matériel et méthodes
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façon à former une deuxième couche, laisser solidifier. Incuber à (44 ± 1) °C dans l’étuve
durant 24 h ± 2h, les colonies de coliformes fécaux apparaissent de couleur violette d’un
diamètre supérieur ou égal à 0,5 mm et parfois entourées d’une zone rougeâtre due à la
précipitation de la bile.
Après la période d’incubation spécifiée, le comptage des colonies caractéristiques de
coliformes thermotolérants pour chaque boite ne contentant pas plus de 300 colonies au total,
est exprimé avec la formule (1).
Figure 13: Schéma illustratif de la recherche et dénombrement des coliformes
thermotolérants par la méthode de double couche sur la gélose VRBL.
IV.4. Recherche et dénombrement des staphylocoques à coagulase positive (ISO 68881 :1999)
Le dénombrement des staphylocoques à coagulase positive se fait avec : Milieu gélosé de
Baird-Parker au jaune d’œuf et au tellurite de potassium, Plasma de lapin et le bouillon cœurcervelle.
Couler une quantité suffisante du milieu complet de Baird-Parker dans des boîtes de Petri
stériles de façon à obtenir une épaisseur de gélose de 4 mm, et laisser solidifier. Transférer à
l’aide d’une pipette graduée 0,1 ml de l’échantillon à partir de la suspension mère (10
-1 ) et les
dilutions (10
-2 ,10
-3 ,10
-4 ,10
-5
), étaler soigneusement l’inoculum avec un râteau en verre.
Laisser sécher les boîtes à température ambiante, puis incuber à 37°C. Après 24 heures, les
boîtes sont lues. Les colonies caractéristiques sont marquées sur le dos de la boîte et on les