Chapitre II :
Matériel et méthodes
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Le nombre N de germes présents dans l’échantillon analysé et considéré comme une moyenne
pondérale de dilution successive est donné par la formule suivante :
𝑵 =
𝚺𝒄𝒐𝒍𝒐𝒏𝒊𝒆𝒔
𝑽 ∗ (𝒏𝟏 + 𝟎, 𝟎𝟐𝒏𝟐) ∗ 𝒅𝟏
… . . (𝟏)
Avec :
o N : Nombre d’UFC par gramme ou par ml de produit initial ;
o Σ colonies : La somme des colonies caractéristiques sur les deux boites retenues ;
o V : Le volume de l’inoculum appliqué à chaque boite (1ml) ;
o d1 : Facteur de dilution correspondant à la première dilution retenue ;
o n1 : nombre de boîtes retenues à la première dilution ;
o n2 : nombre de boîtes retenues à la deuxième dilution ;
Figure 12: Schéma illustratif de la recherche des germes aérobie à 30°C par la technique
d’ensemencement en profondeur avec La gélose pour dénombrement (PCA).
IV.3. Recherche et dénombrement des coliformes thermotolérant (NF V08-060)
Le milieu utilisé pour l’isolement par la méthode de double couche est le VRBL (Gélose au
Cristal Violet, au Rouge Neutre à la Bile et au Lactose). On introduit à l’aide d’une pipette
stérile 1 ml ± 0,02 ml de la suspension mère (10
-1 ) et les dilutions (10
-2 ,10
-3
,10
-4 ,10
-5 ) dans les
boîtes de Pétri à usage unique.
On y coule environs 12 ml de gélose VRBL, homogénéiser parfaitement puis, laisser
solidifier sur une surface froide et horizontale, couler à nouveau 4 ml de milieu gélosé de