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II.5 Caractérisations biochimiques des bactéries isolées
II.5.1 Coloration de Gram
C'est un test qui permet de distinguer deux groupes bactériens Gram+ et Gram-, tout on base
sur la coloration donc par leur aptitude à fixer le violet de gentiane ou la fuschine. Les
bactéries peuvent donc être groupées en deux catégories selon la méthode de coloration de
Gram. Colorer le frottis thermofixé avec une solution de violet de gentiane pendant une
minute, Rincez rapidement le frottis taché avec la solution d'iodure de Lugol et laissez-le là
Une minute. Le frottis est ensuite décoloré plusieurs fois avec de l'alcool à 95% pendant
quelques secondes jusqu'à ce que l'excès de colorant soit éliminé, puis rincez immédiatement
à l'eau claire robinet. Le frottis est ensuite traité avec un colorant en solution Fushine, rincé
Tapotez et séchez rapidement.
Après le traitement, examinez la lame au microscope optique (Objectif 100X en immersion)
(Singleton et Sainsbury, 1984).
Lecture
Les bactéries à Gram positif apparaissent alors violettes et les bactéries à Gram négatif se
recolorent en rose.
II.5.2 Test oxydase
Principe
Les tests d'oxydase détectent un type spécifique de chaîne respiratoire qui se termine par
Chaîne a dû cytochrome c et oxydases apparentées. Les bactéries avec cette chaîne peuvent
oxyder les composés chimiques (N-N-diméthyl-p-phénylènediamine). Les électrons sont
transférés de ce réactif au cytochrome c et de là à l'oxygène par l'oxydase. Ainsi oxydé, Les
réactifs sont fortement violets (Singleton, 1999).
Technique
- Placer le disque d'oxydase de manière aseptique à l’aide d’une pince flambée au
centre d'une lame de verre propre.
- Mouiller la plaque oxydase avec une goutte d'eau distillée stérile.
- Recueillir des colonies bactériennes sur gélose (cultures fraîches) avec une pipette
Pasteur et l'étaler sur le disque
II.5 Caractérisations biochimiques des bactéries isolées
II.5.1 Coloration de Gram
C'est un test qui permet de distinguer deux groupes bactériens Gram+ et Gram-, tout on base
sur la coloration donc par leur aptitude à fixer le violet de gentiane ou la fuschine. Les
bactéries peuvent donc être groupées en deux catégories selon la méthode de coloration de
Gram. Colorer le frottis thermofixé avec une solution de violet de gentiane pendant une
minute, Rincez rapidement le frottis taché avec la solution d'iodure de Lugol et laissez-le là
Une minute. Le frottis est ensuite décoloré plusieurs fois avec de l'alcool à 95% pendant
quelques secondes jusqu'à ce que l'excès de colorant soit éliminé, puis rincez immédiatement
à l'eau claire robinet. Le frottis est ensuite traité avec un colorant en solution Fushine, rincé
Tapotez et séchez rapidement.
Après le traitement, examinez la lame au microscope optique (Objectif 100X en immersion)
(Singleton et Sainsbury, 1984).
Lecture
Les bactéries à Gram positif apparaissent alors violettes et les bactéries à Gram négatif se
recolorent en rose.
II.5.2 Test oxydase
Principe
Les tests d'oxydase détectent un type spécifique de chaîne respiratoire qui se termine par
Chaîne a dû cytochrome c et oxydases apparentées. Les bactéries avec cette chaîne peuvent
oxyder les composés chimiques (N-N-diméthyl-p-phénylènediamine). Les électrons sont
transférés de ce réactif au cytochrome c et de là à l'oxygène par l'oxydase. Ainsi oxydé, Les
réactifs sont fortement violets (Singleton, 1999).
Technique
- Placer le disque d'oxydase de manière aseptique à l’aide d’une pince flambée au
centre d'une lame de verre propre.
- Mouiller la plaque oxydase avec une goutte d'eau distillée stérile.
- Recueillir des colonies bactériennes sur gélose (cultures fraîches) avec une pipette
Pasteur et l'étaler sur le disque