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II.4.2. Isolement
Après l’étape d'enrichissement les inoculum sont utilisée comme suspension pour la culture
bactérien en milieux ONR7a Agar. Après la période d’incubation, on étale à l’aide d’un râteau
dans des boites de pétri, contenant le milieu ONR7a Agar, 100 μl de suspension bactérienne
de chaque échantillon (eau de mer et sédiment). Un embout contenant du pétrole brut est
placé sur le couvercle de la boite de pétri. Les boîtes sont ensuite bien fermées à l’aide d’un
papier parafilm, afin d’éviter l’évaporation du pétrole. Toutes les boîtes sont ensuite incubées
dans une étude à 30°C jusqu’à prolifération bactérienne.
Figure 11. les etapes de la culture bactérienne.
II.4.3. Purification
Après incubations, on a obtenu plusieurs colonies phénotypiquement différentes. Ces colonies
ont fait l’objet de repiquages successives afin d’obtenir des colonies pures.
A partir des différentes boites, des colonies ont été sélectionné puis repiquées dans de
nouvelles boites contenant le milieu ONR7a Agar frais, le pétrole brut a été ajouté et les
boîtes ont été incubées dans les mêmes conditions que l’étape d’enrichissement. Cette étape a
été répétée, jusqu’à l’obtention de colonie pures.
Les bactéries purifiées obtenues à partir des boites de pétri, ont fait l’objet d’un criblage pour
confirmer leur capacité à dégrader les hydrocarbures et à les utiliser comme source de carbone
et d’énergie. Ceci a été réalisé par la cultivation de chaque isolat dans le milieu ONR7a
additionné de pétrole brut (1%, v/v) comme unique source de carbone et d’énergie. Les
cultures ont été incubées à 30°C avec agitation. La consommation des hydrocarbures est
indiquée par la variation de la turbidité.
II.4.2. Isolement
Après l’étape d'enrichissement les inoculum sont utilisée comme suspension pour la culture
bactérien en milieux ONR7a Agar. Après la période d’incubation, on étale à l’aide d’un râteau
dans des boites de pétri, contenant le milieu ONR7a Agar, 100 μl de suspension bactérienne
de chaque échantillon (eau de mer et sédiment). Un embout contenant du pétrole brut est
placé sur le couvercle de la boite de pétri. Les boîtes sont ensuite bien fermées à l’aide d’un
papier parafilm, afin d’éviter l’évaporation du pétrole. Toutes les boîtes sont ensuite incubées
dans une étude à 30°C jusqu’à prolifération bactérienne.
Figure 11. les etapes de la culture bactérienne.
II.4.3. Purification
Après incubations, on a obtenu plusieurs colonies phénotypiquement différentes. Ces colonies
ont fait l’objet de repiquages successives afin d’obtenir des colonies pures.
A partir des différentes boites, des colonies ont été sélectionné puis repiquées dans de
nouvelles boites contenant le milieu ONR7a Agar frais, le pétrole brut a été ajouté et les
boîtes ont été incubées dans les mêmes conditions que l’étape d’enrichissement. Cette étape a
été répétée, jusqu’à l’obtention de colonie pures.
Les bactéries purifiées obtenues à partir des boites de pétri, ont fait l’objet d’un criblage pour
confirmer leur capacité à dégrader les hydrocarbures et à les utiliser comme source de carbone
et d’énergie. Ceci a été réalisé par la cultivation de chaque isolat dans le milieu ONR7a
additionné de pétrole brut (1%, v/v) comme unique source de carbone et d’énergie. Les
cultures ont été incubées à 30°C avec agitation. La consommation des hydrocarbures est
indiquée par la variation de la turbidité.