43
Figure 9. Représentation des étapes de la prération du mileu ONR7a Agar
II.4.1. Enrichissement
L’échantillon prélevé d’eau et de sédiments est utilisé comme inoculum dans le milieu
ONR7a préparés en solution liquide pour l'enrichissement.
A. Pour les échantillons de sédiments :
Dans des flacons contenant 100 ml d’ONR7a, on ajoute 5g de sédiments et 1% (V/V) de
pétrole brut (1ml) comme unique source de carbone et d’énergie. Les flacons sont ensuite
déposés dans un bain marie agitateur réglé à 30°C pendant une semaine. Un contrôle négatif
est également préparé, dans un flacon contenant le milieu et le pétrole brut mais sans
échantillon de sédiment et est incubé dans les mêmes conditions.
B. Pour les échantillons d’eau de mer :
Dans des flacons contenant 100 ml d’ONR7a, on ajoute5ml d’eau de mer prélevée et (1ml)
de pétrole brut, 1% (V/V) par rapport au volume de milieux de culture. Les flacons sont
ensuite déposés dans un bain marie agitateur réglé à 30°C pendant une semaine. Un contrôle
négatif est également préparé, dans un flacon contenant le milieu et le pétrole brut mais sans
échantillon d’eau de mer et est incubé dans les mêmes conditions.
Figure 10. Ajout de pétrole pour l'enrichissement bactérien