Chapitre 2 : Matériels et Méthodes
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A (NA) 665 = (A (NA) 665brut-bc 665)-(B (NA) brut –bc750).
- Mesurer l’absorbance obtenue à chacune de longueur d’onde (λ), en mettant le solvant
d’extraction dans la cuve utilisée.
b) La mesure de blanc de turbidité (B) :
-
Mesurer le blanc de turbidité (de l’échantillon résulte de fines particules de fibres mal
centrifugées) à la longueur d’onde de 750nm, à laquelle les pigments n’absorbant pas ;
en mettant le surnageant du filtre blanc extrait dans l’acétone dans la cuve : on obtient
le blanc brut B brut. Le blanc net de turbidité est obtenu en soustrayant le blanc des cuves :
B= B brut – bc750.
c) Les mesures des absorbances :
- Transférer dans la cuve assez de volume pour faire la mesure (la totalité du faisceau
optique doit traverser l’extrait). Veillez à ne pas entrainer de fibres.
-
Mesurer les absorbances brutes de l’extrait non acidifié(NA) aux longueurs d’ondes de
665 et 750nm : A(NA) 665 bruts et B(NA) 750 bruts.
- Faire sortir la cuve et ajouter (directement dans la cuve) l’acide chlorhydrique 0.3 mol/l
à raison de 10à 20µl. boucher, agiter et on laisser agir l’acide entre 2 et 5 min.
- Mesurer à nouveau les absorbances brutes des extraits acidifiés à 665 et 750 nm :
A(A) 665 brut et B(A) 750 brut.
 Calculs des concentrations de pigment selon la méthode monochromatique :
- Corriger les absorbances brute à 665 et 750 nm en soustrayant les blancs de la cuve,
puis calculer les absorbances nettes à 665nm avant et après acidification selon :
- l’absorbances nette de l’échantillon non acidifié (NA) :
- l’absorbance nette de l’échantillon acidifié (A) :
A (A) 665= (A (A) 665brut – bc665) – (B (A) brut- bc750).
La chlorophylle a est calculée selon la formule suivante :
[Chlorophylle a](µg/l) = 27.7 *(A (NA) 665 – A (A) 665)*(v/V*l).
Avec: v: volume de solvent d’extraction (milliliters).
V: volume d’eau filtrée.
I: longueur du trajet optique.