Matériel et méthodes
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Préparation de l‟extrait méthanolique
-On macère 40 mg de poudre de spiruline dans 20ml de méthanol pendant 10mins à température
ambiante, après filtration on récupère l‟extrait verdâtre.
Mesure de l‟activité
-Selon le protocole décrit par Mansouri et al., (2005) :
-100 μl des solutions d‟extraits de spiruline à différentes concentrations (125 µg/ml, 250µg/ml,
500 µg/ml, 1000 µg/ml, 2000 µg/ml) ont été ajoutés à 1300 μl de DPPH.
-Parallèlement, un contrôle négatif est préparé en mélangeant 100 μl de méthanol (sans extrait)
avec 1300 µl de la solution méthanolique de DPPH.
- La lecture de l‟absorbance à l‟aide d‟un spectrophotomètre est faite contre un blanc préparé
pour chaque concentration à 515 nm après 30 min d‟incubation à l‟obscurité et à température
ambiante.
- Le contrôle positif est représenté par une solution d‟un antioxydant de synthèse qui est l‟acide
ascorbique (antioxydant standard) dont l‟absorbance a été mesuré dans les mêmes conditions que les
échantillons et pour chaque concentration. Chaque test a été réalisé en deux répétitions.
-L‟activité antioxydante est exprimée en concentration d‟inhibition (IC 50 ), définie comme étant la
concentration de l‟extrait nécessaire pour provoquer une diminution de 50% de l‟absorbance du
radical DPPH (515 nm). On détermine, à partir du graphe, le pourcentage d‟inhibition par rapport à
la concentration de l‟extrait. Des valeurs d‟absorbance plus faibles du mélange réactionnel indiquent
une activité piégeage des radicaux libre plus élevée (AOUIR , 2017).
Expression des résultats
-L‟activité anti radicalaire est révélée par la diminution de l‟intensité de la coloration du mélange
qui est exprimée en pourcentage d‟inhibition et calculée selon la formule :
Avec :
PI : Pourcentage d‟inhibition.
D 0 témoin : Absorbance du témoin négatif.
D 0 extrait : Absorbance de l‟extrait.
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Préparation de l‟extrait méthanolique
-On macère 40 mg de poudre de spiruline dans 20ml de méthanol pendant 10mins à température
ambiante, après filtration on récupère l‟extrait verdâtre.
Mesure de l‟activité
-Selon le protocole décrit par Mansouri et al., (2005) :
-100 μl des solutions d‟extraits de spiruline à différentes concentrations (125 µg/ml, 250µg/ml,
500 µg/ml, 1000 µg/ml, 2000 µg/ml) ont été ajoutés à 1300 μl de DPPH.
-Parallèlement, un contrôle négatif est préparé en mélangeant 100 μl de méthanol (sans extrait)
avec 1300 µl de la solution méthanolique de DPPH.
- La lecture de l‟absorbance à l‟aide d‟un spectrophotomètre est faite contre un blanc préparé
pour chaque concentration à 515 nm après 30 min d‟incubation à l‟obscurité et à température
ambiante.
- Le contrôle positif est représenté par une solution d‟un antioxydant de synthèse qui est l‟acide
ascorbique (antioxydant standard) dont l‟absorbance a été mesuré dans les mêmes conditions que les
échantillons et pour chaque concentration. Chaque test a été réalisé en deux répétitions.
-L‟activité antioxydante est exprimée en concentration d‟inhibition (IC 50 ), définie comme étant la
concentration de l‟extrait nécessaire pour provoquer une diminution de 50% de l‟absorbance du
radical DPPH (515 nm). On détermine, à partir du graphe, le pourcentage d‟inhibition par rapport à
la concentration de l‟extrait. Des valeurs d‟absorbance plus faibles du mélange réactionnel indiquent
une activité piégeage des radicaux libre plus élevée (AOUIR , 2017).
Expression des résultats
-L‟activité anti radicalaire est révélée par la diminution de l‟intensité de la coloration du mélange
qui est exprimée en pourcentage d‟inhibition et calculée selon la formule :
Avec :
PI : Pourcentage d‟inhibition.
D 0 témoin : Absorbance du témoin négatif.
D 0 extrait : Absorbance de l‟extrait.