Matériel et méthodes
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VI.2. Activité antibactérienne
L‟activité antibactérienne de l‟extrait de la spiruline contre les deux souches bactériennes
choisies est évaluée par la technique de diffusion sur milieu solide (ou la méthode des disques).
Les bactéries de références utilisées sont :
Staphylococcus aureus ATCC 33862 et E. coli ATCC 25922 proviennent du laboratoire
LBPVBP.
Principe
L‟aromatogramme appelée aussi antibiogramme est une technique utilisée en bactériologie
médicale, elle se réfère à la diffusion d'un agent antimicrobien d'une concentration spécifique à
partir de disques dans le milieu de culture solide, qui a été ensemencé avec l'inoculum. La méthode
est basée sur la détermination d'une zone d'inhibition proportionnelle à la sensibilité bactérienne à
l'antimicrobien présent dans le disque.
Mode opératoire
Revivification des souches
-Les souches identifiées et conservées sur des milieux spécifiques (géloses inclinées) ont été
revivifiées sur bouillon nutritif.
-La revivification consiste à prendre cinq colonies des tubes contenant les souches conservées et
les mettre dans un tube à essai stérile contenant 5ml de bouillon nutritif préalablement préparé.
Après incubation à 37°C (température optimale de croissance de ces bactéries) pendant 24 heures, la
croissance est appréciée par l‟apparition d‟un trouble dans le milieu.
Purification des souches
-L‟étape de purification consiste à réaliser un isolement par stries à partir du bouillon
d‟enrichissement sur gélose spécifique (Mueller-Hinton) préalablement coulée sur des boites de
pétri. L‟incubation est réalisée à 37°C pendant 24 heures. L‟obtention de colonies de même taille et
de même aspect après étuvage, renseigne sur la pureté des souches.
Préparation de l‟extrait de spiruline (CHAKRABORTY et al., 2015)
-5 g de poudre de spiruline a été dissoute dans 100 ml d'eau distillée dans une fiole conique et
agités régulièrement pendant six heures, puis maintenus au repos pendant 18 heures. Le macérât
ainsi obtenu a été filtré avec du papier filtre Wattman n ° 1 et le filtrat a été recueilli dans un ballon
propre. Environ 25 ml du filtrat ont été prélevés dans un bol en porcelaine propre et laissés sécher
dans un incubateur à 40 °C.
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VI.2. Activité antibactérienne
L‟activité antibactérienne de l‟extrait de la spiruline contre les deux souches bactériennes
choisies est évaluée par la technique de diffusion sur milieu solide (ou la méthode des disques).
Les bactéries de références utilisées sont :
Staphylococcus aureus ATCC 33862 et E. coli ATCC 25922 proviennent du laboratoire
LBPVBP.
Principe
L‟aromatogramme appelée aussi antibiogramme est une technique utilisée en bactériologie
médicale, elle se réfère à la diffusion d'un agent antimicrobien d'une concentration spécifique à
partir de disques dans le milieu de culture solide, qui a été ensemencé avec l'inoculum. La méthode
est basée sur la détermination d'une zone d'inhibition proportionnelle à la sensibilité bactérienne à
l'antimicrobien présent dans le disque.
Mode opératoire
Revivification des souches
-Les souches identifiées et conservées sur des milieux spécifiques (géloses inclinées) ont été
revivifiées sur bouillon nutritif.
-La revivification consiste à prendre cinq colonies des tubes contenant les souches conservées et
les mettre dans un tube à essai stérile contenant 5ml de bouillon nutritif préalablement préparé.
Après incubation à 37°C (température optimale de croissance de ces bactéries) pendant 24 heures, la
croissance est appréciée par l‟apparition d‟un trouble dans le milieu.
Purification des souches
-L‟étape de purification consiste à réaliser un isolement par stries à partir du bouillon
d‟enrichissement sur gélose spécifique (Mueller-Hinton) préalablement coulée sur des boites de
pétri. L‟incubation est réalisée à 37°C pendant 24 heures. L‟obtention de colonies de même taille et
de même aspect après étuvage, renseigne sur la pureté des souches.
Préparation de l‟extrait de spiruline (CHAKRABORTY et al., 2015)
-5 g de poudre de spiruline a été dissoute dans 100 ml d'eau distillée dans une fiole conique et
agités régulièrement pendant six heures, puis maintenus au repos pendant 18 heures. Le macérât
ainsi obtenu a été filtré avec du papier filtre Wattman n ° 1 et le filtrat a été recueilli dans un ballon
propre. Environ 25 ml du filtrat ont été prélevés dans un bol en porcelaine propre et laissés sécher
dans un incubateur à 40 °C.