Chapitre Ⅲ : matériel et méthodes
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On couvre la plaque à l’aide d’un couvercle s’il est disponible ou bien en utilisant du para-film et
on l’incube à 30°C pendant 72h (O’toole et Kolter, 1998).
Détection des biofilms
Ces étapes sont effectuées à une température ambiante.
Après l’incubation on jette le contenu des puits en inversant la microplaque et en la secouant
doucement au-dessus d’une bassine poubelle contenant de l’eau de javel dilué.
On rince ensuite la plaque en la submergeant dans une bassine contenant de l’eau claire, une fois
submergée on frotte doucement la plaque avec les doigts tout en portant des gants, pour libérer
les bulles d’air et assurer que l’eau pénètre tous les puits. On retire ensuite la plaque de la
bassine, on l’inverse et on la secoue encore pour éliminer l’eau contenue dans les puits et on
répète cette étape pour une deuxième fois.
On inverse ensuite la plaque sur un chiffon et on tape doucement la plaque pour éliminer le
maximum d’eau possible.
En utilisant une micropipette on ajoute 125 µL de violet de gentiane à chaque puits.
On laisse au repos pendant 10 minutes, puis on élimine le violet de gentiane en le déversant de la
plaque dans une poubelle.
On submerge la plaque dans une nouvelle bassine contenant de l’eau et on frotte doucement la
surface de la plaque pour que l’eau pénètre dans les puits, puis on retire la plaque de l’eau on
l’inverse et on secoue pour éliminer l’excès d’eau, on rince une deuxième fois pour éliminer le
violet de gentiane en surplus.
On rince ensuite encore 2 fois dans une nouvelle bassine contenant de l’eau claire et on inverse la
plaque au-dessus de la poubelle pour éliminer l’eau des puits.
Enfin on tape doucement sur la plaque inversée sur un chiffon pour éliminer le maximum d’eau
possible.
A ce stade si on voit un anneau violet à l’interface air-eau ou au bout des puits cela indique qu’il
y a eu une formation de biofilm (Coffey et Anderson, 2014).
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On couvre la plaque à l’aide d’un couvercle s’il est disponible ou bien en utilisant du para-film et
on l’incube à 30°C pendant 72h (O’toole et Kolter, 1998).
Détection des biofilms
Ces étapes sont effectuées à une température ambiante.
Après l’incubation on jette le contenu des puits en inversant la microplaque et en la secouant
doucement au-dessus d’une bassine poubelle contenant de l’eau de javel dilué.
On rince ensuite la plaque en la submergeant dans une bassine contenant de l’eau claire, une fois
submergée on frotte doucement la plaque avec les doigts tout en portant des gants, pour libérer
les bulles d’air et assurer que l’eau pénètre tous les puits. On retire ensuite la plaque de la
bassine, on l’inverse et on la secoue encore pour éliminer l’eau contenue dans les puits et on
répète cette étape pour une deuxième fois.
On inverse ensuite la plaque sur un chiffon et on tape doucement la plaque pour éliminer le
maximum d’eau possible.
En utilisant une micropipette on ajoute 125 µL de violet de gentiane à chaque puits.
On laisse au repos pendant 10 minutes, puis on élimine le violet de gentiane en le déversant de la
plaque dans une poubelle.
On submerge la plaque dans une nouvelle bassine contenant de l’eau et on frotte doucement la
surface de la plaque pour que l’eau pénètre dans les puits, puis on retire la plaque de l’eau on
l’inverse et on secoue pour éliminer l’excès d’eau, on rince une deuxième fois pour éliminer le
violet de gentiane en surplus.
On rince ensuite encore 2 fois dans une nouvelle bassine contenant de l’eau claire et on inverse la
plaque au-dessus de la poubelle pour éliminer l’eau des puits.
Enfin on tape doucement sur la plaque inversée sur un chiffon pour éliminer le maximum d’eau
possible.
A ce stade si on voit un anneau violet à l’interface air-eau ou au bout des puits cela indique qu’il
y a eu une formation de biofilm (Coffey et Anderson, 2014).