Chapitre Ⅲ : matériel et méthodes
38
Le mécanisme de cette coloration est connu. Le violet de gentiane se fixe sur des composants
cytoplasmiques et après un temps de coloration, toutes les bactéries sont violettes. Chez les
bactéries à Gram négatif, la paroi, riche en lipides, laisse passer l'alcool (ou le mélange alcool +
acétone) qui décolore le cytoplasme alors que, chez les bactéries à Gram positif, la paroi constitue
une barrière imperméable à l'alcool et le cytoplasme demeure coloré en violet.
Un frottis fixé à la chaleur est coloré pendant une minute avec une solution de violet de gentiane,
le frottis coloré est rincé rapidement avec une solution iodo-iodurée de Lugol, et il y est maintenu
pendant une minute. Le frottis est ensuite décoloré avec l’alcool à 95 % pendant quelques
secondes jusqu'à élimination de l’excès du colorant puis rincé immédiatement avec l’eau du
robinet. Le frottis est ensuite traité avec un colorant qui est une solution de Fushine, rincé
rapidement au robinet et séché. Après ce traitement, La lame est examinée au microscope optique
(objectif 100 X sous immersion). Les cellules Gram négatif apparaissent roses et les cellules
Gram positif apparaissent sous une couleur violette (Singleton et Sainsbury, 1984).
Figure Ⅲ.6. Aspect des bactéries Gram
+ et Gram
- sous microscope
III.6.2 Test de la catalase
Principe
La catalase est une enzyme contenant du fer, qui catalyse la décomposition du peroxyde
d’hydrogène (H2O2) en eau et en oxygène.
38
Le mécanisme de cette coloration est connu. Le violet de gentiane se fixe sur des composants
cytoplasmiques et après un temps de coloration, toutes les bactéries sont violettes. Chez les
bactéries à Gram négatif, la paroi, riche en lipides, laisse passer l'alcool (ou le mélange alcool +
acétone) qui décolore le cytoplasme alors que, chez les bactéries à Gram positif, la paroi constitue
une barrière imperméable à l'alcool et le cytoplasme demeure coloré en violet.
Un frottis fixé à la chaleur est coloré pendant une minute avec une solution de violet de gentiane,
le frottis coloré est rincé rapidement avec une solution iodo-iodurée de Lugol, et il y est maintenu
pendant une minute. Le frottis est ensuite décoloré avec l’alcool à 95 % pendant quelques
secondes jusqu'à élimination de l’excès du colorant puis rincé immédiatement avec l’eau du
robinet. Le frottis est ensuite traité avec un colorant qui est une solution de Fushine, rincé
rapidement au robinet et séché. Après ce traitement, La lame est examinée au microscope optique
(objectif 100 X sous immersion). Les cellules Gram négatif apparaissent roses et les cellules
Gram positif apparaissent sous une couleur violette (Singleton et Sainsbury, 1984).
Figure Ⅲ.6. Aspect des bactéries Gram
+ et Gram
- sous microscope
III.6.2 Test de la catalase
Principe
La catalase est une enzyme contenant du fer, qui catalyse la décomposition du peroxyde
d’hydrogène (H2O2) en eau et en oxygène.