Chapitre 2
Matériel et méthodes
20
II.2.3.2. Lecture
Le dénombrement se fait dans les boites qui contiennent au moins 15 et au plus 300 colonies.
Le résultat est exprimé avec la formule (1).
II.2.4. Les staphylocoques à coagulase positif
En bactériologie alimentaire, les staphylocoques sont dénombrés le plus souvent sur le milieu
Chapman ou Baird-Parker (Marchal et al, 1991).
Dans des conditions aseptiques, on a coulé le milieu Chapman dans des boites de pétri et on a
laissé se solidifier. Par la suite, le milieu est ensemencé en surface avec 0,1 ml de la
suspension mère et ses dilutions. L’inoculum est ensuite étalé à l’aide d’un râteau en verre.
L’incubation se fait à 37°C pendant 48h.
Les colonies jaunes suspectées doivent subir des tests de confirmation :
Test d’oxydase (oxydase positif)
Test de catalase (catalase positif)
Test de coagulase (coagulase positif)
II.2.5. Recherche de Salmonelle
La recherche de Salmonella est réalisée en 4 étapes selon la norme internationale ISO 6579.
La mise en évidence de salmonelles passe obligatoirement par le pré-enrichissement,
l'enrichissement, l'isolement et enfin l'identification.
II.2.5.1. Pré-enrichissement
Il permet la revivification des bactéries et la récupération de l'ensemble de leurs potentialités
au terme de leur incubation (Jean-Louis, 2004 ; Navoun, 2005). Il est réalisé comme suit :
Une quantité exacte de 25 g de chair de poisson est pesée à l’aide d’une balance de
précision est mélangée à 225 ml de milieu SFB (bouillon au Sélénite) + 4 disques
SFB.
Broyage du mélange à l’aide d’un mixeur stérile pendant 2 mn et le verser
aseptiquement dans un flacon stérile. Ce mélange est placé dans une étuve à 37°C
pendant 24h.
Matériel et méthodes
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II.2.3.2. Lecture
Le dénombrement se fait dans les boites qui contiennent au moins 15 et au plus 300 colonies.
Le résultat est exprimé avec la formule (1).
II.2.4. Les staphylocoques à coagulase positif
En bactériologie alimentaire, les staphylocoques sont dénombrés le plus souvent sur le milieu
Chapman ou Baird-Parker (Marchal et al, 1991).
Dans des conditions aseptiques, on a coulé le milieu Chapman dans des boites de pétri et on a
laissé se solidifier. Par la suite, le milieu est ensemencé en surface avec 0,1 ml de la
suspension mère et ses dilutions. L’inoculum est ensuite étalé à l’aide d’un râteau en verre.
L’incubation se fait à 37°C pendant 48h.
Les colonies jaunes suspectées doivent subir des tests de confirmation :
Test d’oxydase (oxydase positif)
Test de catalase (catalase positif)
Test de coagulase (coagulase positif)
II.2.5. Recherche de Salmonelle
La recherche de Salmonella est réalisée en 4 étapes selon la norme internationale ISO 6579.
La mise en évidence de salmonelles passe obligatoirement par le pré-enrichissement,
l'enrichissement, l'isolement et enfin l'identification.
II.2.5.1. Pré-enrichissement
Il permet la revivification des bactéries et la récupération de l'ensemble de leurs potentialités
au terme de leur incubation (Jean-Louis, 2004 ; Navoun, 2005). Il est réalisé comme suit :
Une quantité exacte de 25 g de chair de poisson est pesée à l’aide d’une balance de
précision est mélangée à 225 ml de milieu SFB (bouillon au Sélénite) + 4 disques
SFB.
Broyage du mélange à l’aide d’un mixeur stérile pendant 2 mn et le verser
aseptiquement dans un flacon stérile. Ce mélange est placé dans une étuve à 37°C
pendant 24h.