CHAPITRE II : Matériels et méthodes
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Figure II.12 : Réduction du radical DPPH•.
II.4.1.2. Mode opératoire :
L’activité de piégeage des radicaux DPPH est déterminée selon la méthode de Rodeiro et al,.
(2015) en y apportant quelques modifications. La solution mère est d’une concentration de
1mg/ml. La solution du DPPH est préparée dans 100 ml de méthanol pour 4mg de DPPH.
L’expérience est effectuée sur 6 échantillons de concentrations différentes (25 ;
50 ; 100 ; 200 ; 500 ; 1000 ; 2000 µg/ml) qui sont préparées dans des tubes à essais à partir d’une
solution mère de 1mg/ml, complétées avec du méthanol jusqu’à 2ml et mélangées avec 3900µl
de DPPH. L’acide ascorbique (vitamine C) est utilisé comme échantillon de référence et préparé
dans les mêmes conditions opératoires.
La lecture de l’absorbance est faite à l’aide d’un spectrophotomètre UV-Visible à 517 nm âpres
60 min d’incubation, à l’abri de la lumière et à température ambiante.
Le pourcentage d’inhibition du radical est calculé selon la formule (5) ci-dessous :
% I =
𝐃𝐎 𝐛𝐥𝐚𝐧𝐜 – 𝐃𝐎 é𝐜𝐡𝐚𝐧𝐭𝐢𝐥𝐥𝐨𝐧
𝐃𝐎 𝐛𝐥𝐚𝐧𝐜
× í µí¿í µí¿Ží µí¿Ž
% I : pourcentage d’inhibition de DPPH.
DO Blanc : densité optique de blanc.
DO échantillon : densité optique de l’échantillon.
IC50 la concentration de l’échantillon testé nécessaire pour réduire 50 % des radicaux DPPH est
calculée graphiquement par la régression linéaire des graphes tracés donnant le pourcentage
d’inhibition en fonction des différentes concentrations.