CHAPITRE II : Matériels et méthodes
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Figure II.8: Précipitations des polysaccharides
Figure II.9: Extrait de polysaccharides
avec l’éthanol.
obtenus avant séchage.
II.3.1.3. Dosages colorimétriques des oses totaux :
II.3.1.3.1. Principe :
La quantification des oses constitutifs des polysaccharides s’effectue par des dosages
colorimétriques. C’est en présence d’acide sulfurique, concentré et à chaud, que les liaisons
glycosidiques des polysaccharides subissent une hydrolyse quantitative. La déshydratation des
unités osidiques libérées conduit à la formation des dérivés furfuriques et des dérivés d’acide 5hydroxyméthylfurfural. Ces derniers peuvent réagir par condensation avec le phénol pour les
oses totaux (Dubois et al., 1956).
II.3.1.3.2. Mode opératoire :
La teneur en oses totaux constitutifs des polysaccharides d’Ulva fasciata est quantifiée par la
méthode de Dubois et al., (1956) utilisant l’acide sulfurique et le phénol comme réactifs. Les
liaisons glycosidiques sont hydrolysées, à chaud, en présence d’acide sulfurique concentré et la
déshydratation des unités osidiques conduit à la formation de composés furfuriques. Ces derniers
interagissent avec le phénol par condensation pour former des composés de coloration orangejaune absorbant à 485 nm. Une gamme étalon de glucose (Figure II.10) est réalisée avec 6
concentrations différentes (0, 0.05, 0.1, 0.15, 0.20, 0.25 g/L) dans l’eau distillée. Une solution de
phénol à 5 % (m/v) est préparée avec de l’eau distillée.
Le principe du dosage est le suivant :
Déposer dans les tubes de dosage 200 µl d’échantillon ;
Ajouter 200 µl de la solution de phénol ;
Ajouter 1 ml d’H2SO4 à 80 % ;
Vortexer les tubes (5 secondes) puis les incuber 5 minutes dans un bain marie sec à 90 °C ;
Laisser reposer à température ambiante et à l’obscurité pendant 30 min ;
Mesurer l’absorbance à 485 nm.
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Figure II.8: Précipitations des polysaccharides
Figure II.9: Extrait de polysaccharides
avec l’éthanol.
obtenus avant séchage.
II.3.1.3. Dosages colorimétriques des oses totaux :
II.3.1.3.1. Principe :
La quantification des oses constitutifs des polysaccharides s’effectue par des dosages
colorimétriques. C’est en présence d’acide sulfurique, concentré et à chaud, que les liaisons
glycosidiques des polysaccharides subissent une hydrolyse quantitative. La déshydratation des
unités osidiques libérées conduit à la formation des dérivés furfuriques et des dérivés d’acide 5hydroxyméthylfurfural. Ces derniers peuvent réagir par condensation avec le phénol pour les
oses totaux (Dubois et al., 1956).
II.3.1.3.2. Mode opératoire :
La teneur en oses totaux constitutifs des polysaccharides d’Ulva fasciata est quantifiée par la
méthode de Dubois et al., (1956) utilisant l’acide sulfurique et le phénol comme réactifs. Les
liaisons glycosidiques sont hydrolysées, à chaud, en présence d’acide sulfurique concentré et la
déshydratation des unités osidiques conduit à la formation de composés furfuriques. Ces derniers
interagissent avec le phénol par condensation pour former des composés de coloration orangejaune absorbant à 485 nm. Une gamme étalon de glucose (Figure II.10) est réalisée avec 6
concentrations différentes (0, 0.05, 0.1, 0.15, 0.20, 0.25 g/L) dans l’eau distillée. Une solution de
phénol à 5 % (m/v) est préparée avec de l’eau distillée.
Le principe du dosage est le suivant :
Déposer dans les tubes de dosage 200 µl d’échantillon ;
Ajouter 200 µl de la solution de phénol ;
Ajouter 1 ml d’H2SO4 à 80 % ;
Vortexer les tubes (5 secondes) puis les incuber 5 minutes dans un bain marie sec à 90 °C ;
Laisser reposer à température ambiante et à l’obscurité pendant 30 min ;
Mesurer l’absorbance à 485 nm.