242__________________________________Biochimie clinique
2.2.2.1. Méthode calorimétrique en point final
Exemple : phosphatases alcalines déterminées par la méthode de
Bodansky.
Les phosphatases alcalines agissent sur le (3 glycérophosphate pour le transformer en glycérol et acide phosphorique. Le dosage en point final des phosphates produit une coloration proportionnelle à la quantité de phosphatases alcalines dans le sérum.
2.2.2.2. Méthode calorimétrique en cinétique
Exemple : phosphatases alcalines déterminées par la méthode de Bessey
Lowry.
Cette méthode peut être réalisée aussi bien en point final qu'en cinétique. Elle
utilise la réaction suivante, en milieu alcalin :
Paranitrophényï phosphate + H^O ——
os ^
a ——> paranitrophénol
+ acide phosphorique
La vitesse de formation du paranitrophénol est proportionnelle à la quantité
d'enzyme dans le sérum.
2.2.2.3. Détermination de l'activité aspartate 2 oxoglutarate aminotransférase
TGO ou ASAT (aspartate aminotransférase) selon les recommandations de la SFBC
Les deux réactions suivantes sont couplées :
T/~^/~\
1) L-aspartate + a-cétoglutarate <—————> oxaloacétate + L-glutamate
2) Oxalaoacétate + NADH^ <
MDH > L-malate + NAD-^
MDH = Malate déshydrogénase. a-cétoglutarate = 2 oxoglutarate
Deux temps peuvent être distingués :
- mise en température des réactifs et élimination des réactions parasites (ici
consommation de l'oxaloacétate présent dans l'échantillon) ;
- déclenchement de la réaction par addition de 2 oxoglutarate et mesure de
la vitesse de diminution de l'absorbance à 340 nm (cinétique décroissante)
après que l'équilibre entre les deux réactions ait été atteint.
Les méthodes cinétiques utilisant le couple NAD"
1
', NADH, H"
1
" sont aujourd'hui
très employées en chimie clinique pour déterminer des activités enzymatiques.
2.2.3. Standardisation des méthodes de mesure d'activité enzymatique
L'utilisation des méthodes recommandées par la Société française de biologie
clinique (SFBC) pour mesurer la concentration catalytique des différentes
2.2.2.1. Méthode calorimétrique en point final
Exemple : phosphatases alcalines déterminées par la méthode de
Bodansky.
Les phosphatases alcalines agissent sur le (3 glycérophosphate pour le transformer en glycérol et acide phosphorique. Le dosage en point final des phosphates produit une coloration proportionnelle à la quantité de phosphatases alcalines dans le sérum.
2.2.2.2. Méthode calorimétrique en cinétique
Exemple : phosphatases alcalines déterminées par la méthode de Bessey
Lowry.
Cette méthode peut être réalisée aussi bien en point final qu'en cinétique. Elle
utilise la réaction suivante, en milieu alcalin :
Paranitrophényï phosphate + H^O ——
os ^
a ——> paranitrophénol
+ acide phosphorique
La vitesse de formation du paranitrophénol est proportionnelle à la quantité
d'enzyme dans le sérum.
2.2.2.3. Détermination de l'activité aspartate 2 oxoglutarate aminotransférase
TGO ou ASAT (aspartate aminotransférase) selon les recommandations de la SFBC
Les deux réactions suivantes sont couplées :
T/~^/~\
1) L-aspartate + a-cétoglutarate <—————> oxaloacétate + L-glutamate
2) Oxalaoacétate + NADH^ <
MDH > L-malate + NAD-^
MDH = Malate déshydrogénase. a-cétoglutarate = 2 oxoglutarate
Deux temps peuvent être distingués :
- mise en température des réactifs et élimination des réactions parasites (ici
consommation de l'oxaloacétate présent dans l'échantillon) ;
- déclenchement de la réaction par addition de 2 oxoglutarate et mesure de
la vitesse de diminution de l'absorbance à 340 nm (cinétique décroissante)
après que l'équilibre entre les deux réactions ait été atteint.
Les méthodes cinétiques utilisant le couple NAD"
1
', NADH, H"
1
" sont aujourd'hui
très employées en chimie clinique pour déterminer des activités enzymatiques.
2.2.3. Standardisation des méthodes de mesure d'activité enzymatique
L'utilisation des méthodes recommandées par la Société française de biologie
clinique (SFBC) pour mesurer la concentration catalytique des différentes