Enzymes plasmatiques__________________________________241
La technique de Bodansky utilise le p-glycérophosphate comme substrat.
Après coupure du glycérol et du phosphate par la phosphatase alcaline, on termine par un dosage du phosphate à 37°. Les valeurs usuelles sont alors 1 à
4 unités Bodansky, ce qui correspond à 18 et 27 U/l.
La technique de King et Armstrong utilise le phénylphosphate à 37° comme
substrat et dose le phénol formé. Les valeurs usuelles, selon King et Armstrong,
sont de 4 à 12 U K.A., dont la correspondance avec les U/l est donnée dans le
tableau 10.3.
Tableau 10.3 • Correspondance des unités Bodansky, King Armstrong et Bessey
Lowry en U/l.
Méthodes
Méthodes
Bodansky
King Armstrong
Bessey Lowry
utilisées
optimisées
Valeurs usuelles
30-126 U/l
1-4UB
4-12 UKA
1,2-ôUBL
Valeurs usuelles
transformées en U/l
30-126 U/l
18-27 U/l
10-46 U/l
30-100 U/l
La méthode de Bessey Lowry a pour substrat du paranitrophénylphosphate qui
sera transformé par la phosphatase en paranitrophénol dont on dosera la coloration jaune au spectrophotomètre.
Le tableau 10.3 montre bien que l'expression des résultats en U/l n'apporte
aucune standardisation si la technique utilisée n'est pas mentionnée.
2.2.2. Principe général de la mesure d'une activité
Pour déterminer l'activité enzymatique d'une enzyme on utilise la réaction
catalysée par l'enzyme et l'on dose la quantité de produit formé ou la quantité
de substrat détruite au cours d'un temps déterminé (la minute).
Nous pouvons pour cela utiliser des méthodes colorimétriques en point final
comme c'est le cas dans la méthode Bodansky ou bien utiliser la cinétique
d'apparition du produit comme dans la méthode de Bessey Lowry.
Enfin bien souvent, on essaie d'introduire un coenzyme nicotinique, soit
dans une réaction directe, comme c'est le cas pour la détermination de la lacticodéshydrogénase (LDH), soit en utilisant une cascade de réactions afin de terminer par une réaction utilisant le couple NAD"
1
", NADH.H
4 ' ce qui est le cas de
la détermination de l'aspartate amino-transférase (AS AT), ou le couple NADP
4
",
NADPH,H'
1
' pour la détermination de l'activité catalytique de la créatine kinase
(CK).
La technique de Bodansky utilise le p-glycérophosphate comme substrat.
Après coupure du glycérol et du phosphate par la phosphatase alcaline, on termine par un dosage du phosphate à 37°. Les valeurs usuelles sont alors 1 à
4 unités Bodansky, ce qui correspond à 18 et 27 U/l.
La technique de King et Armstrong utilise le phénylphosphate à 37° comme
substrat et dose le phénol formé. Les valeurs usuelles, selon King et Armstrong,
sont de 4 à 12 U K.A., dont la correspondance avec les U/l est donnée dans le
tableau 10.3.
Tableau 10.3 • Correspondance des unités Bodansky, King Armstrong et Bessey
Lowry en U/l.
Méthodes
Méthodes
Bodansky
King Armstrong
Bessey Lowry
utilisées
optimisées
Valeurs usuelles
30-126 U/l
1-4UB
4-12 UKA
1,2-ôUBL
Valeurs usuelles
transformées en U/l
30-126 U/l
18-27 U/l
10-46 U/l
30-100 U/l
La méthode de Bessey Lowry a pour substrat du paranitrophénylphosphate qui
sera transformé par la phosphatase en paranitrophénol dont on dosera la coloration jaune au spectrophotomètre.
Le tableau 10.3 montre bien que l'expression des résultats en U/l n'apporte
aucune standardisation si la technique utilisée n'est pas mentionnée.
2.2.2. Principe général de la mesure d'une activité
Pour déterminer l'activité enzymatique d'une enzyme on utilise la réaction
catalysée par l'enzyme et l'on dose la quantité de produit formé ou la quantité
de substrat détruite au cours d'un temps déterminé (la minute).
Nous pouvons pour cela utiliser des méthodes colorimétriques en point final
comme c'est le cas dans la méthode Bodansky ou bien utiliser la cinétique
d'apparition du produit comme dans la méthode de Bessey Lowry.
Enfin bien souvent, on essaie d'introduire un coenzyme nicotinique, soit
dans une réaction directe, comme c'est le cas pour la détermination de la lacticodéshydrogénase (LDH), soit en utilisant une cascade de réactions afin de terminer par une réaction utilisant le couple NAD"
1
", NADH.H
4 ' ce qui est le cas de
la détermination de l'aspartate amino-transférase (AS AT), ou le couple NADP
4
",
NADPH,H'
1
' pour la détermination de l'activité catalytique de la créatine kinase
(CK).