K Protéines plasmatiques____________________________________229
•L2. Étude de la réaction antigène-anticorps grâce au signal émis
1
par un réactif marqué
HLU. Dosages en phase hétérogène. Mesure de la distribution du réactif
•
marqué
~ Les molécules de réactif marqué sont réparties en deux compartiments selon
qu'elles sont ou non engagées dans une réaction antigène-anticorps. Il sera donc
nécessaire d'avoir une étape de séparation physique pour ne conserver que les
molécules marquées liées, suivie d'une deuxième étape de mesure du signal.
C'est donc bien la distribution du réactif marqué qui est étudiée.
Suivant la nature du marquage, on distingue :
4.2.1.1. Marquage isotopique
| La radio-immunologie combine la sensibilité des mesures radioactives à la
spécificité de la reaction immunologique.
Décrite pour la première fois par Berson et Yallow en 1962 à propos du dosage
de l'insuline plasmatique, cette méthode (radio-immuno assay ou RIA) permet
divers schémas réactionnels. À côté du schéma historique par compétition, on
décrit en effet des méthodes « sandwich » par double ou simple capture.
Les techniques par compétition restent très classiques. Leur principe est le
\ suivant :
Les antigènes marqués et non marqués entrent en compétition vis-à-vis des
sites anticorps. Après incubation de durée variable, l'antigène radioactif qui ne
s'est pas fixé sur les sites anticorps est séparé des complexes antigènes marqués
-anticorps et éliminé.
La mesure de la radioactivité de la fraction liée est faite dans un compteur
adapté, généralement y (cas de l'iode 125). L'isotope le plus utilisé pour marquer antigènes ou anticorps est en effet l'iode 125, émetteur "y et de période
60 jours. L'iodation des résidus de tyrosine des peptides et protéines est en effet
relativement facile.
Permettant de mesurer des concentrations de l'ordre du picogramme par ml,
cette technique a permis d'innombrables progrès en physiologie et médecine
humaines. En France, cependant, elle n'est utilisable que par de rares laboratoires agréés, ce qui a considérablement limité son développement.
Le processus est représenté simplifié dans la figure 9.11.
F
4.2.1.2. Marquage emymatique
| Les méthodes immunoenzymologiques ou EIA pour « enzymo-immuno
1 assay » ont été les premières à remplacer les RIA pour certains dosages.
Ouvrant ainsi les techniques d'immunodosages en phase hétérogène (ELISA
ou « enzyme-linked immunosorbent assay » à tous les laboratoires de biologie
j clinique, l'immunoenzymologie a donc aussi un intérêt historique.
•L2. Étude de la réaction antigène-anticorps grâce au signal émis
1
par un réactif marqué
HLU. Dosages en phase hétérogène. Mesure de la distribution du réactif
•
marqué
~ Les molécules de réactif marqué sont réparties en deux compartiments selon
qu'elles sont ou non engagées dans une réaction antigène-anticorps. Il sera donc
nécessaire d'avoir une étape de séparation physique pour ne conserver que les
molécules marquées liées, suivie d'une deuxième étape de mesure du signal.
C'est donc bien la distribution du réactif marqué qui est étudiée.
Suivant la nature du marquage, on distingue :
4.2.1.1. Marquage isotopique
| La radio-immunologie combine la sensibilité des mesures radioactives à la
spécificité de la reaction immunologique.
Décrite pour la première fois par Berson et Yallow en 1962 à propos du dosage
de l'insuline plasmatique, cette méthode (radio-immuno assay ou RIA) permet
divers schémas réactionnels. À côté du schéma historique par compétition, on
décrit en effet des méthodes « sandwich » par double ou simple capture.
Les techniques par compétition restent très classiques. Leur principe est le
\ suivant :
Les antigènes marqués et non marqués entrent en compétition vis-à-vis des
sites anticorps. Après incubation de durée variable, l'antigène radioactif qui ne
s'est pas fixé sur les sites anticorps est séparé des complexes antigènes marqués
-anticorps et éliminé.
La mesure de la radioactivité de la fraction liée est faite dans un compteur
adapté, généralement y (cas de l'iode 125). L'isotope le plus utilisé pour marquer antigènes ou anticorps est en effet l'iode 125, émetteur "y et de période
60 jours. L'iodation des résidus de tyrosine des peptides et protéines est en effet
relativement facile.
Permettant de mesurer des concentrations de l'ordre du picogramme par ml,
cette technique a permis d'innombrables progrès en physiologie et médecine
humaines. En France, cependant, elle n'est utilisable que par de rares laboratoires agréés, ce qui a considérablement limité son développement.
Le processus est représenté simplifié dans la figure 9.11.
F
4.2.1.2. Marquage emymatique
| Les méthodes immunoenzymologiques ou EIA pour « enzymo-immuno
1 assay » ont été les premières à remplacer les RIA pour certains dosages.
Ouvrant ainsi les techniques d'immunodosages en phase hétérogène (ELISA
ou « enzyme-linked immunosorbent assay » à tous les laboratoires de biologie
j clinique, l'immunoenzymologie a donc aussi un intérêt historique.