TABLE DES MATIÈRES
461
10.6.5. Le coefficient de contrôle de flux d'un enzyme
pour le flux au travers de sa propre réaction ..............................................................349
10.7. Les coefficients de réponse : la réponse partagée .....................................................350
10.8. Contrôle et régulation....................................................................................................351
10.9. Mécanismes de régulation ............................................................................................355
10.9.1. Canalisation de métabolites.........................................................................................355
10.9.2. Cascades d'enzymes convertibles ...............................................................................357
10.9.3. Le rôle métabolique de l'adénylate kinase..................................................................359
Problèmes .................................................................................................................................362
11 – LES RÉACTIONS RAPIDES .....................................................................................................365
11.1. Les limitations des mesures à l'état stationnaire.....................................................365
11.1.1. Phases transitoires .......................................................................................................365
11.1.2. Etapes «lentes» et «rapides» dans les mécanismes enzymatiques............................366
11.1.3. Ambiguïtés dans l'analyse à l'état stationnaire de systèmes
impliquant des isomérisations d'intermédiaires..........................................................367
11.1.4. Mauvais conditionnement ...........................................................................................369
11.2. Libération du produit avant la fin de cycle catalytique .............................................370
11.2.1. Les cinétiques avec burst ............................................................................................370
11.2.2. Titrage du site actif......................................................................................................372
11.3. Les techniques expérimentales.....................................................................................373
11.3.1. Les classes de méthodes..............................................................................................373
11.3.2. Les méthodes de flux continu .....................................................................................375
11.3.3. Les méthodes de stopped-flow....................................................................................376
11.3.4. Le quenched flow ........................................................................................................377
11.3.5. Les méthodes de relaxation.........................................................................................380
11.4. La cinétique des phases transitoires ..........................................................................382
11.4.1. Les systèmes hors d'équilibre......................................................................................382
11.4.2. Simplification de mécanismes complexes..................................................................386
11.4.3. Les systèmes proches de l'équilibre ............................................................................389
Problèmes .................................................................................................................................392
12 – ESTIMATION DES CONSTANTES CINÉTIQUES ....................................................................393
12.1. L'effet des erreurs expérimentales dans l'analyse des données cinétiques ............393
12.2. Ajustement sur une équation de MICHAELIS et MENTEN
par la méthode des moindres carrés ...........................................................................396
12.2.1. Introduction d'erreurs dans l'équation de MICHAELIS et MENTEN .............................396
12.2.2. Estimations de V et de K m ............................................................................................397
12.2.3. Résultats correspondants pour une déviation standard uniforme des vitesses .........399
12.3. Aspects statistiques du graphique linéaire direct ....................................................400
12.3.1. Comparaison entre les statistiques classiques
et les statistiques à distribution libre...........................................................................400
12.3.2. Application au graphique linéaire direct.....................................................................402
12.3.3. Absence de la nécessité d'utiliser des pondérations ...................................................403
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10.6.5. Le coefficient de contrôle de flux d'un enzyme
pour le flux au travers de sa propre réaction ..............................................................349
10.7. Les coefficients de réponse : la réponse partagée .....................................................350
10.8. Contrôle et régulation....................................................................................................351
10.9. Mécanismes de régulation ............................................................................................355
10.9.1. Canalisation de métabolites.........................................................................................355
10.9.2. Cascades d'enzymes convertibles ...............................................................................357
10.9.3. Le rôle métabolique de l'adénylate kinase..................................................................359
Problèmes .................................................................................................................................362
11 – LES RÉACTIONS RAPIDES .....................................................................................................365
11.1. Les limitations des mesures à l'état stationnaire.....................................................365
11.1.1. Phases transitoires .......................................................................................................365
11.1.2. Etapes «lentes» et «rapides» dans les mécanismes enzymatiques............................366
11.1.3. Ambiguïtés dans l'analyse à l'état stationnaire de systèmes
impliquant des isomérisations d'intermédiaires..........................................................367
11.1.4. Mauvais conditionnement ...........................................................................................369
11.2. Libération du produit avant la fin de cycle catalytique .............................................370
11.2.1. Les cinétiques avec burst ............................................................................................370
11.2.2. Titrage du site actif......................................................................................................372
11.3. Les techniques expérimentales.....................................................................................373
11.3.1. Les classes de méthodes..............................................................................................373
11.3.2. Les méthodes de flux continu .....................................................................................375
11.3.3. Les méthodes de stopped-flow....................................................................................376
11.3.4. Le quenched flow ........................................................................................................377
11.3.5. Les méthodes de relaxation.........................................................................................380
11.4. La cinétique des phases transitoires ..........................................................................382
11.4.1. Les systèmes hors d'équilibre......................................................................................382
11.4.2. Simplification de mécanismes complexes..................................................................386
11.4.3. Les systèmes proches de l'équilibre ............................................................................389
Problèmes .................................................................................................................................392
12 – ESTIMATION DES CONSTANTES CINÉTIQUES ....................................................................393
12.1. L'effet des erreurs expérimentales dans l'analyse des données cinétiques ............393
12.2. Ajustement sur une équation de MICHAELIS et MENTEN
par la méthode des moindres carrés ...........................................................................396
12.2.1. Introduction d'erreurs dans l'équation de MICHAELIS et MENTEN .............................396
12.2.2. Estimations de V et de K m ............................................................................................397
12.2.3. Résultats correspondants pour une déviation standard uniforme des vitesses .........399
12.3. Aspects statistiques du graphique linéaire direct ....................................................400
12.3.1. Comparaison entre les statistiques classiques
et les statistiques à distribution libre...........................................................................400
12.3.2. Application au graphique linéaire direct.....................................................................402
12.3.3. Absence de la nécessité d'utiliser des pondérations ...................................................403