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CINÉTIQUE ENZYMATIQUE
variation de l’instrumentation, une détérioration des solutions stocks, une
augmentation de la température ambiante ou la fatigue de l’expérimentateur. La
figure 4.4c illustre le problème contraire. Dans ce cas, les points sont espacés
régulièrement de manière suspicieuse, avec une distribution plus large que la
distribution autour de la droite ajustée. Ceci suggère que les répétitions surestiment
l’erreur aléatoire réelle, peut être parce que la figure présente les données
provenant de trois expériences réalisées à des moments différents et avec des
échantillons différents.
La question de savoir combien de fois une mesure doit être répétée, n’a pas une seule et
unique réponse. Dans chaque cas individuel, la réponse dépend de la difficulté à
réaliser la mesure, du temps pendant lequel les solutions d’enzyme et de substrat
peuvent être conservées, de la grandeur des erreurs expérimentales et de la complexité
de l’équation utilisée pour l’ajustement. Le premier point essentiel est d’inclure
suffisamment de concentrations de substrat (d’inhibiteur…) pour caractériser
correctement la forme de la courbe. Pour un enzyme qui obéit à l’équation de
MICHAELIS et MENTEN, il est possible de n’utiliser que 5 concentrations de substrat à
condition qu’elles soient adéquatement espacées entre 0,5 K m et 5 K m . Néanmoins avec
un enzyme à deux substrats, qui suit un modèle cinétique simple, il est nécessaire
d’enregistrer un minimum de 25 combinaisons différentes de concentrations. Pour les
enzymes dont le comportement dévie de celui prévu par un modèle simple, le nombre
de mesure doit encore être augmenté.
Ces chiffres sont basés sur l’hypothèse que l’analyse complète des données
fournira des graphiques aussi bien que des analyses statistiques par un ordinateur.
De le cas de ces dernières, il n’est pas nécessaire d’organiser les concentrations
dans une grille, puisque la validité de l’analyse n’est pas affectée même si le calcul
d’une droite appartenant à une famille de droites est basé sur un seul point ; ainsi
une expérience à deux substrats pourrait en principe fournir des résultats
satisfaisants en utilisant seulement huit combinaisons différentes de concentrations.
Le point important est de concentrer les observations dans les régions qui
fournissent la meilleure information permettant de valider le modèle proposé.
Néanmoins, l’œil humain peut facilement repérer sur un graphique un comportement inattendu qui serait négligé par le meilleur des logiciels, et pour cette raison,
il n’est pas raisonnable de se reposer entièrement sur l’analyse faite par
l’ordinateur. Ces impératifs placent une contrainte sur la mise au point
d’expérience puisque, pour obtenir un graphique satisfaisant, il est nécessaire de
disposer d’un certain nombre de points pour tracer chaque droite.
Ce n’est que lorsque le nombre de combinaisons différentes de concentrations
nécessaires pour l’expérience a été déterminé, que le nombre de répétitions à
réaliser peut être décidé. Supposons que 25 combinaisons de concentrations soient
nécessaires et qu’il soit possible de mesurer jusqu’à 60 cinétiques sur le temps
imparti et en fonction de la stabilité de la solution d’enzyme. Dans un tel cas, il
serait approprié de réaliser en triple une dizaine de mesures (étalées sur toute
CINÉTIQUE ENZYMATIQUE
variation de l’instrumentation, une détérioration des solutions stocks, une
augmentation de la température ambiante ou la fatigue de l’expérimentateur. La
figure 4.4c illustre le problème contraire. Dans ce cas, les points sont espacés
régulièrement de manière suspicieuse, avec une distribution plus large que la
distribution autour de la droite ajustée. Ceci suggère que les répétitions surestiment
l’erreur aléatoire réelle, peut être parce que la figure présente les données
provenant de trois expériences réalisées à des moments différents et avec des
échantillons différents.
La question de savoir combien de fois une mesure doit être répétée, n’a pas une seule et
unique réponse. Dans chaque cas individuel, la réponse dépend de la difficulté à
réaliser la mesure, du temps pendant lequel les solutions d’enzyme et de substrat
peuvent être conservées, de la grandeur des erreurs expérimentales et de la complexité
de l’équation utilisée pour l’ajustement. Le premier point essentiel est d’inclure
suffisamment de concentrations de substrat (d’inhibiteur…) pour caractériser
correctement la forme de la courbe. Pour un enzyme qui obéit à l’équation de
MICHAELIS et MENTEN, il est possible de n’utiliser que 5 concentrations de substrat à
condition qu’elles soient adéquatement espacées entre 0,5 K m et 5 K m . Néanmoins avec
un enzyme à deux substrats, qui suit un modèle cinétique simple, il est nécessaire
d’enregistrer un minimum de 25 combinaisons différentes de concentrations. Pour les
enzymes dont le comportement dévie de celui prévu par un modèle simple, le nombre
de mesure doit encore être augmenté.
Ces chiffres sont basés sur l’hypothèse que l’analyse complète des données
fournira des graphiques aussi bien que des analyses statistiques par un ordinateur.
De le cas de ces dernières, il n’est pas nécessaire d’organiser les concentrations
dans une grille, puisque la validité de l’analyse n’est pas affectée même si le calcul
d’une droite appartenant à une famille de droites est basé sur un seul point ; ainsi
une expérience à deux substrats pourrait en principe fournir des résultats
satisfaisants en utilisant seulement huit combinaisons différentes de concentrations.
Le point important est de concentrer les observations dans les régions qui
fournissent la meilleure information permettant de valider le modèle proposé.
Néanmoins, l’œil humain peut facilement repérer sur un graphique un comportement inattendu qui serait négligé par le meilleur des logiciels, et pour cette raison,
il n’est pas raisonnable de se reposer entièrement sur l’analyse faite par
l’ordinateur. Ces impératifs placent une contrainte sur la mise au point
d’expérience puisque, pour obtenir un graphique satisfaisant, il est nécessaire de
disposer d’un certain nombre de points pour tracer chaque droite.
Ce n’est que lorsque le nombre de combinaisons différentes de concentrations
nécessaires pour l’expérience a été déterminé, que le nombre de répétitions à
réaliser peut être décidé. Supposons que 25 combinaisons de concentrations soient
nécessaires et qu’il soit possible de mesurer jusqu’à 60 cinétiques sur le temps
imparti et en fonction de la stabilité de la solution d’enzyme. Dans un tel cas, il
serait approprié de réaliser en triple une dizaine de mesures (étalées sur toute