Chapitre II : Matériels et Méthodes
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La concentration des protéines en % (ou g protéine/100 g échantillon) est calculée par la formule
suivante :
C (%) = C (mg/mL) × 10
-3 × 100
II.2.5.3.2. Dosage des lipides
La détermination de la teneur en matière grasse des échantillons est effectuée par deux méthodes
suivantes :
Méthode de Folch :
Cette méthode est réalisée au niveau du laboratoire biochimie marine 2 à l’ENSSMAL, selon le
protocole reporté par Ramalhosa et al. (2012), proposé et modifié par notre promoteur :
Principe
C’est une méthode gravimétrique pour l’extraction des lipides totaux à partir des échantillons
lyophilisés, elle basée sur une extraction à froid par un mélange de solvants de différente
polarité.
Manipulation
Cette méthode est appliquée aux mêmes échantillons lyophilisés pour extraire les lipides totaux.
1g de chaque échantillon est additionné à 50 mL de mélange Chloroforme/Méthanol (2:1, v/v).
L’ensemble est bien homogénéisé dans un agitateur magnétique pendant 30 minutes (sous hotte
chimique). Centrifuger le mélange à 3000 tr/min pendant 10 min et le filtrer. Transvaser le
contenu dans une ampoule à décanter. Fermer bien l’ampoule avec son bouchon en verre et
l’agiter un moment (environ 30 secondes) puis ouvrir le robinet pour permettre le dégazage des
vapeurs de solvant. Refermer l’ampoule et répéter à nouveau les opérations d’agitation et de
dégazage jusqu’à vous entendez plus de vapeurs de solvant s’échappant de l’ampoule. Ajouter 5
mL d’eau distillée, laisser le mélange décanté, puis éliminer la phase aqueuse qui se trouve en
bas de l’ampoule et récupérer la phase organique (rincer bien l’ampoule avec 10mL de solvant)
qui contient de lipides extraits dans erlenmeyer. Ajouter un peu de sulfate de sodium anhydre
Na 2 SO 4 pour éliminer les traces d’eau puis transférer le contenu de l’erlenmeyer dans un ballon
taré. Évaporer le ballon à 45 °C jusqu’à élimination total du solvant et peser le ballon.
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La concentration des protéines en % (ou g protéine/100 g échantillon) est calculée par la formule
suivante :
C (%) = C (mg/mL) × 10
-3 × 100
II.2.5.3.2. Dosage des lipides
La détermination de la teneur en matière grasse des échantillons est effectuée par deux méthodes
suivantes :
Méthode de Folch :
Cette méthode est réalisée au niveau du laboratoire biochimie marine 2 à l’ENSSMAL, selon le
protocole reporté par Ramalhosa et al. (2012), proposé et modifié par notre promoteur :
Principe
C’est une méthode gravimétrique pour l’extraction des lipides totaux à partir des échantillons
lyophilisés, elle basée sur une extraction à froid par un mélange de solvants de différente
polarité.
Manipulation
Cette méthode est appliquée aux mêmes échantillons lyophilisés pour extraire les lipides totaux.
1g de chaque échantillon est additionné à 50 mL de mélange Chloroforme/Méthanol (2:1, v/v).
L’ensemble est bien homogénéisé dans un agitateur magnétique pendant 30 minutes (sous hotte
chimique). Centrifuger le mélange à 3000 tr/min pendant 10 min et le filtrer. Transvaser le
contenu dans une ampoule à décanter. Fermer bien l’ampoule avec son bouchon en verre et
l’agiter un moment (environ 30 secondes) puis ouvrir le robinet pour permettre le dégazage des
vapeurs de solvant. Refermer l’ampoule et répéter à nouveau les opérations d’agitation et de
dégazage jusqu’à vous entendez plus de vapeurs de solvant s’échappant de l’ampoule. Ajouter 5
mL d’eau distillée, laisser le mélange décanté, puis éliminer la phase aqueuse qui se trouve en
bas de l’ampoule et récupérer la phase organique (rincer bien l’ampoule avec 10mL de solvant)
qui contient de lipides extraits dans erlenmeyer. Ajouter un peu de sulfate de sodium anhydre
Na 2 SO 4 pour éliminer les traces d’eau puis transférer le contenu de l’erlenmeyer dans un ballon
taré. Évaporer le ballon à 45 °C jusqu’à élimination total du solvant et peser le ballon.