Chapitre II : Matériels et Méthodes
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Les dilutions préparées sont portées dans le tableau suivant :
Tableau II- 1 : les dilutions préparées pour le dosage dans la méthode de Lowry
Échantillon
Dilution
PDC
50 ; 100
Hydrolysats des milieux de production
50 ; 100 ; 200
Hydrolysats de la méthode pH-stat
50 ; 100 ; 200
Culot 1 (PDC résiduel)
50 ; 100 ; 140
Culot 2 (PDC résiduel)
50 ; 100 ; 140
PDC sans prétraitement
100 ; 200 ; 400
1 mL des surnageants dilués proprement est ajouté à 5 mL de réactif Lowry (dont la composition
est citée en bas). Après l’homogénéisation, les tubes ont été mis au repos pendant 10 min. 0,5
mL du réactif Folin-Ciocalteue dilué deux sont extemporanément, additionné au mélange. Après
l’agitation, l’ensemble est mis au repos à l’obscurité pendant au moins 30 min (Annexe Ifigure15). L’absorbance de cette solution est lue à 660 nm dans le spectrophotomètre UVvisible, en utilisant un blanc d’eau distillée (au lieu des surnageants) traité de la même façon.
Le réactif Lowry est préparé en mélangeant 50 mL Lowry A (1 g Na2CO3 + 50 mL NaOH à 0,1
mol/l) avec 1 mL Lowry B (5g CuSO4, 5H2O + 10g Tartrate de Na et K, 1 litre d’eau distillée).
Une gamme d’étalonnage est réalisée à partir de la solution de sérum d’albumine bovine (SAB)
étalon mère à 500 µg/mL. Des dilutions de la solution mère sont préparées (entre 100 et 500
µg/mL) pour établir la courbe d’étalonnage voire Annexe I-figure 2. 1 mL de chaque dilution est
préparé de la même manière que les échantillons.
 Calcul
L’équation de la courbe d’étalonnage a été utilisée pour déduire la concentration des protéines :
Avec :
C : Concentration des protéines dans 1 mL de l’échantillon,
P : la pente de la courbe d’étalonnage,
ABS : l’absorbance de l’échantillon dilué,
D : Dilution de l’échantillon